1. 将实验小鼠脱颈处死，75%乙醇浸泡5min，固定，备皮，取背部皮肤至于含双抗的冷PBS缓冲液中。

      2. 仔细剥离脂肪，血管等多余组织，PBS清洗，加胰酶消化1h。

      3. 分离真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。

      4. 将真皮部分于培养皿内剪碎，加入适量胰酶，转移至15ml离心管内，37℃恒温水浴消化1h。

      5. 消化结束后，加入H-DMEM*培养基终止反应，1000rpm离心5min，弃上清。

      6. PBS清洗一遍，离心弃上清。

      7. 将清洗后的组织块均匀铺于6cm培养皿内，加入2ml*培养基，37℃，5%CO₂培养箱内培养24h。

     8. 第二天，补充培养基至5ml，继续培养，3-4天后有细胞游出。

     9. 7天后已有大量细胞游出，去除组织块并换新鲜培养基继续培养。

• 实验图例

细胞培养

END

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