1. 检查取样室内门并关紧;
2. 打开取样室外门，将菌种放入取样室后即关上外门;
3. 取样室充氮置换三次过程：打开真空泵，先抽真空度500ml汞柱(66kPa)以上停，然后人工打开氮气阀2进气，使指针回复零位，关掉阀2。第二次重复操作一次。第三次操作时，使真空度500ml汞柱(66kPa)以上停，然后打开阀4进混合气，使指针回复零位，关掉阀4。取样室充氮置换三次过程结束;
4. 如选定真空度较低就需要增加置换的次数;
5. 取样室外门开启、关紧，再抽低真空度100ml汞柱(13kPa)检验；
6.混合气瓶、氮气瓶输出压力调整：调节减压阀，使输出压力0.1Mpa左右。
厌氧培养箱长期使用的条件:
1.每天在操作室内打开美兰指示纸观察，如不正常就必须重新换气;
2.要长期连续输入微量的混合气体，使补进的氮气能和微量的氧结合通过催化吸收，保证室内厌氧状态，补入混合气流量选定为每分钟10ml左右;
3. 连续培养运行一天，更换一次除氧剂和干燥剂。