1、细胞密度对电转的影响

 

细胞系电转的细胞密度最好在0.5M-2.0M/20ul，或2.5M-10M/100ul. 常用1M/20ul. PBMC直径更小，细胞密度一般为1M-5M/20ul, 或5M-25M/100ul。细胞密度越高可以增加细胞间电流辅助，从而增加细胞的有效电转面积。密度高时电压需要稍微调高一些，所以电转时细胞密度根据实验需要选定后尽量不要变化。

需要特别注意的地方：一个样品加进电击管后，不要等候，马上进行电转，完成后再处理下一个样品，不要把一批样品全部加样完成后再一起电转。等候时间过长，细胞沉降也会导致电击管内上下细胞密度不均匀而降低电转效率。电转完成后细胞可以马上取出培养，也可以等全部样品处理完毕再取出培养。

 

2、细胞聚团对电转的影响

 

当细胞聚团时，其中只有一侧细胞可以被电转，中间和另一侧细胞不能被电转，降低电转效率。所以消化细胞过程中注意细胞不要成团。

 

3、温度对电转的影响

 

温度对电转影响也很大。一般室温（23度）适宜进行电转实验。温度越低，需要电压越高。4度电转比室温23度电转大概需要增加3%到5%的电压。所以为保证电转实验结果可重复性，需要将每次的电转温度保持一致。

 

4、DNA质量对电转的影响

 

DNA越纯净，越有利于电转。DNA中杂质较多时，细胞毒性大，非常不利于电转。市场上在售的品牌质粒提取试剂盒一般都可以。DNA加得比较多时，电转效率呈线性递增。但是电转时DNA加的过高也会产生细胞毒性，电压需要稍微下调。所以DNA浓度应根据实验需要相应调整，浓度范围一般在10ug/ml-200ug/ml。