浅析基因电转染仪脉冲过程
时间:2022-05-27 阅读:469
基因电转染仪作为物理方法的一种,不仅能将DNA、RNA,还能将抗体、酶及其他生物活性分子转入细菌、酵母、动物细胞和植物细胞。它是一种简便的基因转移系统,具有其他转移方法不能对比的*性,如操作简便、快捷,可重复性强,转染率高,适用广谱等,尤其对目前一般认为难转的悬浮培养细胞也能获得较高的转染。
电穿孔法是通过电场作用于细胞几微秒到几毫秒之后,在细胞膜上暂时形成小孔或开口,把大分子如DNA等导入细胞并进入细胞核的技术。其过程简述如下:首先在电击过程中,细胞膜上出现穿孔,质粒在电泳力的作用下与细胞膜接触,并在细胞膜上电穿孔的区域形成一种可转移的复合物。再次电击后,质粒脱离复合物并扩散至细胞质内,开始瞬转;同时小部分质粒进入核内与染色体整合,开始稳转。一旦DNA扩散至细胞,膜上小孔会关闭。
浅析基因电转染仪脉冲过程:
1)脉冲波形
脉冲波形主要分为两种:1、方波脉冲;2、指数递减波脉冲。方波脉冲是指:电压瞬间升至预设电压,保持电压放电,然后瞬间终止放电。一般哺乳动物细胞电转染时选择方波脉冲,有较高的转染效率和细胞存活率。指数递减波脉冲是指:先对电容充电,然后让电容*放电,其电压变化呈指数递减。一般这种波形的脉冲电转染适用于细菌、酵母菌、昆虫细胞。
2)脉冲时间
脉冲时间的选定主要取决与脉冲波形。在方波脉冲中,脉冲时间可直接设定。在指数递减波脉冲中,脉冲时间是指电压衰减至初始电压1/3时所用的时间,等于电容(C)与电阻(R)的乘积,单位是ms。在参数优化中,增加电压应当降低脉冲时间,而减小电压则应当增大脉冲时间。