基因电转染仪在进行电转染前通常涉及的三个步骤
时间:2023-06-15 阅读:404
基因电转染是一种利用电场将DNA转移至目标细胞的技术。主要优点是其高效性,它可以将DNA转移到高达90%的细胞中,而通过病毒载体进行的转染通常只能达到60-80%的转染效率。此外,电转染通常较为经济实用,因为它在控制条件下可重复使用。相对于其他转染技术,基因电转染仪的构造格式也更为简单。然而,电转染也存在一些局限性。它通常仅适用于较小的DNA分子,因为较大的分子难以穿过细胞膜。此外,该过程可能会对细胞产生短暂的伤害,不过这种瞬时伤害是可恢复的。在使用电转染进行基因编辑及遗传转变等应用中,仍需要仔细控制实验条件,以避免任何异常的结果。
基因电转染仪进行电转染通常涉及的三个基本步骤:
1.制备DNA-所需的DNA必须被放置在适当的缓冲液中。缓冲液必须维护DNA的稳定性和松散的亚结构,以便DNA能够成功地穿过目标细胞膜。
2.准备电极-因为该过程涉及到外加电场,因此需要至少两个电极(阳极和阴极),以便形成一个稳定的电场。将阴极放置在电转染装置底部的明胶或琼脂凝胶样品上,而阳极则通常浸入含缓冲液的样品中。
3.电转染-将含DNA的溶液添加到样品中,通常与靶细胞混合。当电场应用于样品时,它将导致目标细胞膜短暂的孔。这使得DNA得以轻松地渗透入细胞内。
基因电转染仪使用注意事项:
1.在实验前,必须对操作进行深入理解和实验设计,避免由于操作不当或设备设定错误而引发的误差。
2.制备转染混合液时,应根据实验需要决定使用的转染试剂类型和量。
3.调整参数时需要参照设备说明书,确保操作正确。任何不当操作或设定都会影响结果。
4.转染后的细胞在培养中一定要做到规范化,避免任何不必要的突变或污染,影响数据的准确性。