在实验室培养细胞用于研究和生物制剂生产并非易事。它需要在许多领域取得成功，包括优化培养基和条件、适当的设备、良好的技术和有效的协议。细胞培养基优化在提高生产力、确保细胞生长和健康方面起着至关重要的作用，甚至是影响关键质量属性的杠杆。因此，细胞培养科学家在促进现有和新治疗方法的发现和生产方面起着至关重要的作用。

 

细胞培养作为*的工具，从20世纪出现至今经历了巨大的变化。从60多年前基础培养基DMEM的诞生到今天细胞培养成为生物医药、组织工程和再生医学主流研究中*的部分，难以想象，如果没有了细胞培养技术，生命科学研究将会是什么样子。

 

很多人都绕不开养细胞这个坎，稍不留神，就给我们造成内心阴影面积三室一厅。不是栽在细胞污染上，就是活力不好，怎么避免细胞不明不白的挂掉？我们来看一下。

 

培养细胞死亡的原因有哪些？

1.培养箱内无 CO2

2.培养箱内温度波动太大

3.细胞冻存或复苏过程中损伤

4.培养液渗透压不正确

5.培养液种有毒代谢产物堆积

 

遇到以上问题该如何应对？

 

1.检测培养箱内 CO2

2.检查培养箱内温度

3.取新的保存细胞种

4.检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为 260~350 mOsm/kg。加入额外试剂如 HEPES 或药物都有可能影响培养液渗透压。

5.换入新鲜培养液

而细胞培养做为生物学研究最基础的技术之一，可以说是渗透科研界的方方面面。工欲善其事，必先利其器。细胞好不好，就看你懂不懂细胞培养的各种技术了。

 

一：原代培养

 

从原代组织中分离细胞的常用的方法是酶解法（胰蛋白酶和胶原酶）。

 

用无菌的解剖刀和剪子将组织剪成3~4mm小片，用平衡液（无钙镁离子）清洗组织碎片后去除上清液，并加入0.25%的胰蛋白酶（Trypsin，100mg组织加入1ml胰蛋白酶）或者胶原酶（Collagenase，50~200单位/ml），孵育4-18h。离心取上清后，用平衡液清洗几次后，用*培养基悬浮细胞，进行培养。

 

二：传代培养

 

依据细胞生长的特点，传代方法有3种：

 

1. 悬浮生长细胞传代（离心法）

将悬浮细胞离心（1000 rpm， 3 min）去上清，收集沉淀物加新培养基，混匀后进行传代培养。

 

2. 半悬浮生长细胞传代（直接吹打法）

此类细胞（如Hela细胞）部分贴壁，但黏贴不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁上脱落下来，进行传代。

 

3. 贴壁生长细胞传代（酶消化法）

去除瓶内培养液后，加入1-2ml 0.25%的胰蛋白酶液（以消化液覆盖整个瓶底为准）37℃静置2-10min（显微镜下动态监测）。移去蛋白酶液，加入培养液反复吹打瓶壁细胞，离心将细胞沉淀用培养液制成细胞悬液。吸取1/10—1/40细胞悬液，接种于含有适量新鲜培养液的新培养瓶中进行传代培养。