全自动细胞计数仪在单细胞测序中的应用如下
时间:2023-01-28 阅读:241
全自动细胞计数仪是一种基于经典台盼蓝染色法原理开发的细胞计数分析仪,集成了*的光学成像技术和智能图像识别技术,可以快速准确地测量细胞浓度和细胞活力,为细胞计数人员提供方便,消除了繁琐的过程,血细胞计数板引起的时间长、误差大等问题。
目前,全自动细胞计数仪广泛应用于各种科学研究活动,包括癌症、免疫学、传染病、干细胞、临床试验以及农作物和家禽疾病预防研究。同时,它还广泛涉及医疗领域、生物制药、细胞治疗、工业生产和农业生产。
全自动细胞计数仪的计数方法:
1、台盼蓝染色法:
台盼蓝染色是分别计数死亡细胞和活细胞的方法之一。染色的原理是台盼蓝无法穿透活细胞的完整细胞膜,因此活细胞不被染色;然而,死亡细胞的细胞膜被破坏,染料通过细胞膜在细胞中富集,使细胞变蓝。然而,台盼蓝染色可能无法准确区分有核细胞和细胞碎片,因此它倾向于低估细胞总数并高估细胞生存能力。
2、荧光细胞计数法:
吖啶橙/碘化丙啶染色原理:活细胞通过AO染色发出绿色荧光,而死细胞通过PI染色发出红色荧光。重要的是,对于具有复杂背景的细胞,例如外周血单核细胞,具有更多细胞片段或簇的细胞数量可以避免检测到细胞片段。这种方法最近也被应用于单细胞基因组学,其中绿色对应于完整的细胞,红色对应于成功分离的细胞核。该策略允许研究人员计算未裂解的剩余细胞在细胞总数中的百分比,并计数细胞核以指示样品质量,帮助研究人员确定是否继续单细胞基因组学过程。
全自动细胞计数仪在单细胞测序中的应用如下:
单细胞基因组学技术目前正在全面应用,如单细胞RNA测序和染色质转座酶可及性测序。与对大量细胞进行测序的传统方法相比,单细胞基因组学技术突出了细胞之间的差异,这有助于更深入地了解样本材料。例如,scRNA-seq可以比较健康和患病状态的转录谱,而ATAC-seq可以解释染色质的可及性及其对基因表达的影响。
然而,这些研究都需要对分离的细胞核进行精确计数,因为文库制备需要少量未裂解的细胞,并且样品中没有细胞团块和碎片。此外,许多单细胞基因组学技术需要完整的细胞核才能正常工作。