Cell Freezing Medium (1x)

Catalog Number：PZ110R

01/产品概述

　　细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术，是细胞长期保存的重要手段。细胞冻存液通过冷冻保护剂在冻存过程中对细胞进行保护，以减少或防止冷冻冰晶对细胞造成的损伤。

　　LeapWal无血清细胞冻存液PZ110R是立谱沃生物自主研发的一款无血清、无需程序降温的细胞冻存液，广泛适用于多种哺乳动物细胞的冻存。该冻存液特别优化的配方含有双重保护细胞的成份，从细胞内和细胞外同时保护细胞免受冻存时冰晶的损伤，大大提高了细胞的复苏率和活力，可用于细胞长期保存。该产品配方成分明确，不含动物来源性蛋白，不含血清，可减少各类细菌、病毒和支原体等污染，保证冻存细胞的安全。

　　LeapWal 无血清细胞冻存液 PZ110R与传统冻存液相比，本产品不仅可以避免使用血清，降低血清中未知成分和病毒等感染物质给冻存带来的影响与风险，同时，可省去繁琐费时的程序降温过程，细胞可重悬于本产品后直接置于-80℃冰箱长期保存，或次日转移到液氮完成整个冻存过程。

02/产品组分

03/保存条件

冰袋（wetice）运输。4℃保存，有效期6个月。若长期不用，可-30℃至-10℃保存，有效期24个月。

04/产品特点

　　1.即用型细胞冻存液，无需程序降温，直接冻存于-80℃冰箱，长期保存（>5年）

　　2.安全性高，无动物源性蛋白，不含血清，病毒、病菌和支原体等污染可能性低

　　3.冻存细胞复苏率高达90%以上，细胞活力好

　　4.成分明确，极大降低批次间差异

05/实验流程概要

06/实验步骤

一：细胞冻存步骤

　　1.选择处于对数生长期的细胞，按照常规方法收集贴壁细胞或悬浮细胞于离心管中。

　　2.1000rpm-2000rpm，离心5分钟，收集培养细胞沉淀，弃上清液。

　　3.加入适量4℃预冷的LeapWalCellFreezingMedium(1x)重悬细胞，制成细胞悬液。

　　Ø按照细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存液的量，推荐冻存密度：1x106至5x106cells/mL。

　　4.将细胞悬液分装至已标记的冻存管中，建议每管1mL或1.5mL。

　　5.直接将细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中，可长期冷冻保存。如果想放入液氮中长期保存，需先放入-80℃冰箱至少12小时，方可移至液氮罐中长期保存。

二：冻存细胞复苏步骤

　　1.在15mL离心管中加入5-10mL平衡至室温的*培养基。

　　2.从-80℃冰箱/液氮中取出冻存的细胞，立即放入37℃水浴锅或其他细胞复苏设备中，迅速解冻。

　　3.将冻存管中的细胞悬液逐滴转移至预先准备好的含*培养基的离心管中，1000rpm-1500rpm，离心5分钟，收集细胞沉淀，弃上清（操作时小心，切勿将细胞沉淀移去）。

　　4.加入适量平衡至室温的*培养基重悬细胞，接种到事先准备好的培养容器中，轻轻摇晃培养容器，使细胞分布均匀。

　　5.镜检细胞后，可根据各自研究的需要和方法经行细胞常规培养。培养5-24h后，观察细胞状态，可视情况更换新鲜细胞培养液。

07/适用范围

　　LeapWal 无血清细胞冻存液 PZ110R 广泛适用于多种哺乳动物细胞的冻存。无需程序降温，-80℃可长期保存（>5年），细胞存活率在90%以上。

08/质量控制

　　LeapWal无血清细胞冻存液均已通过严格的内毒素、渗透压、pH测试和无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）。

09/注意事项

　　1.若长期不用，本产品可-30℃至-10℃保存，再次使用时，请在2-8℃或室温（22-25℃，不超过4小时）融化LeapWal Cell  Freezing Medium，避免反复冻融；

　　2.使用LeapWal  Cell Freezing Medium冻存细胞后，应尽量减少冻存细胞在外存放时间，尽快移入-80℃超低温冰箱长期保存；

　　3.Leap Wal Cell Freezing Medium含有DMSO，部分对DMSO敏感的细胞、淋巴细胞或干细胞冻存，建议使用本产品对其进行试验性冻存、复苏、培养，确认性能后再进行正式冻存；

　　4.该产品在室温条件下放置的时间不宜过长，以免影响冻存效率；

　　5.免责声明:本公司将不为任何不正当使用此产品所发生的意外负责；

　　6.为了您的健康安全，请规范操作，穿戴实验服与手套开展实验；

　　7.本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及治疗。

10/实验案例分析

　　1.选择处于对数生长期的四种细胞，按照常规方法收集细胞于离心管中。

　　2.1000rpm，离心5分钟，收集培养细胞沉淀，弃上清液。

　　3.加入适量4℃预冷的LeapWalCellFreezingMedium、T公司冻存液、X公司冻存液分别重悬细胞，制成细胞悬液。冻存密度为1x106cells/mL。

　　4.将细胞悬液分装至已标记的冻存管中，每管1mL，放入-80℃冰箱中，冷冻保存。

　　5.冻存6个月后，进行细胞复苏，对复苏后的细胞进行台盼蓝染色，统计细胞存活率。

图2: 细胞冻存6个月后复苏，对复苏后的细胞进行台盼蓝染色，统计细胞存活率

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