平滑肌细胞培养基的应用介绍
时间：2023-01-05 阅读：1301
平滑肌细胞培养基是一个基于碳酸氢盐的缓冲体系，可以在孵育的5%的CO₂的气体环境下维持一个围绕pH7.2的酸碱缓冲体系。本体系是一个无菌的液体混合系统，其中包含必须和非必须氨基酸、维生素、激素、生长因子、微量元素和一些其他的有机和无机化合物以及胎牛血清(10%)。
平滑肌细胞培养基SMCM可用于平滑肌细胞增殖实验：
以25cm2(50ml)一次性培养瓶培养细胞，细胞在经过消化传代后明显较原代胖大，细胞可自行沿一定方向生长，表现为峰谷样图案。平滑肌细胞随着传代次数增多，体积会逐渐增大，突触明显并逐渐丧失梭形结构，当细胞生长密集时，拥挤的细胞逐层环绕，中心可隆起呈结节状。将酶消化法获得的细胞传代至第3代，分别以平滑肌细胞培养基SMCM或含10%新生牛血清的DMEM/F12培养基(10%-F12)进行培养，及时记录细胞生长情况。以每孔2000个细胞为标准将第3代平滑肌细胞接种于96孔板内，每个样本需重复3～4个辅助测量孔。将96孔板静置于细胞培养箱内，6小时后观察细胞贴壁、舒展。以每100μl培养基加10μlCCK-8试剂的比例配置混悬剂。清除各待测孔培养基后，每孔加入混悬剂100μl。将96孔板静置于培养箱内2h后取出，置于微孔板振荡器上震荡1min，将96孔板转至酶标仪，在450nm波长下读取各孔数据并记录。测量吸光值后的孔不再重复使用。每24h测量一次实验孔吸光值，连续测量9天(216h)。观察结果。
使用该培养基时应注意将基础介质储存在4℃，将SMCGS、FBS和P/S溶液储存在-20℃。避光保存。