披沙炼金 | 配方颗粒色谱柱推荐之金钱草检测
时间：2022-06-24 阅读：567
在之前的文章中，我们主要为大家梳理并推荐了适用于各类中药配方颗粒检测的安捷伦色谱柱，并对广金钱草提供推荐色谱柱和分析实例。相信这满满的干货，一定让大家意犹未尽。那么本期就让我们持续输出，为大家带来关于金钱草配方颗粒检测的色谱柱推荐。赶紧跟上，一起出发吧！
安捷伦创新的色谱柱 InfinityLab Poroshell 120 采用 Agilent 专有的表面多孔型填料技术, 其 1.9μm 色谱柱具有以下优点：
柱效比 1.8μm 全多孔类型的色谱柱更高，具更高峰容量，适合复杂样品分析；
与市场上同类产品比较，具有更好的峰型；
高能耐 1300 bar 压力，具有较长的柱寿命，即使在接近极限的压力下使用；
能和 Agilent 1290 Infinity 等超高效液相色谱完美匹配，实现快速或高分离度分析。
本实验选用的色谱柱 Poroshell 120 SB-C18, 2.1x100mm, 1.9μm 与原标准中 1.6μm 的色谱柱相比柱效相当，但压力相对降低，有利于延长色谱柱寿命和提高方法的耐用性。
根据国家药品监督管理局 《国家药品标准》中金钱草配方颗粒的检测项目，对其特征谱图和含量测定都采用高效液相色谱法。特征谱图测定中要求理论板数按槲皮素峰计算应不低于 10000，以及对供试品应呈现的特征峰相对保留时间和相对峰面积做了规定。含量测定中规定了理论板数按槲皮素峰计算应不低于 2500。
1、特征谱图
实验结果与讨论
图 1. 金钱草配方颗粒供试品的特征谱图与标准中对照谱图的比较 （峰2（S1）：山柰酚-3-O-（2,6-α-L-二吡喃鼠李糖基-β-D-吡喃葡萄糖苷）；峰4：山柰酚-3-O-芸香糖苷；峰5（S2）：槲皮素；峰6：山柰酚）
色谱条件：
流动相：A：0.2%磷酸；B：乙腈
梯度：0-15min，12%-15%B；15-30min，15%-35%B；30-30.1min，35%-12%B；30.1-35min，12%B
流速：0.2ml/min
柱温：30°C
检测波长：364nm(4nm),Ref:off;采样频率：20Hz
进样量：1μL
系统适用性结果见下表：
结果
1）供试品色谱中呈现标准中规定的7个特征峰，且相对保留时间都在规定范围内；
2）峰2、峰4与S2峰的相对峰面积在规定范围内；
3）理论板数按槲皮素峰计算为408280，远高于规定值10000，符合标准要求。
2、含量测定
实验结果与讨论
图 2. 金钱草配方颗粒供试品含量测定 HPLC 法和 UHPLC 法谱图对照
色谱条件：
流动相：A：0.4%磷酸水溶液，B：甲醇；52%A/48%B(HPLC法)，55%A/45%B(UHPLC法)
流速：1ml/min(HPLC法)；0.5ml/min(UHPLC法)
柱温：30°C
检测波长：360nm(4nm),Ref:off;采样频率：2.5Hz(HPLC法)；20Hz(UHPLC法)
进样量：10μL(HPLC法)；1μL(UHPLC法)
系统适用性结果见下表：
结果：
1）主峰槲皮素和山柰酚峰型对称，分离度均符合含量测定要求，理论板数按槲皮素峰计算均符合标准中的规定；
2）方法从HPLC转移到UHPLC，分析时间缩短至原来的1/5，且UHPLC方法提高了槲皮素,山柰酚和样品中杂峰的分离度。
实验结论：
本实验选用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 和 ZORBAX SB-C18 色谱柱对金钱草配方颗粒特征谱图及含量进行了检测，均符合标准中对系统适用性的要求。本方法可用于金钱草配方颗粒的分离和检测，为该配方颗粒的质量保证提供检测依据。
仪器系统及色谱柱推荐
1290 四元 UHPLC 系统: 全能泵(G7104A)，自动进样器(G7167B)，柱温箱(G7116B)，DAD(G7117B)
1260 四元 UHPLC 系统: 四元泵(G7111B)，自动进样器(G7129A)，柱温箱(G7116A)，DAD(G7115A)
其它详细操作可以参考 Agilent 配方颗粒图谱集，或联系 Agilent。