Agilent 在 2003 年首家推出了亚 2 微米粒径的色谱柱，由此掀开了超高效液相色谱分离（UHPLC）的序幕。ZORBAX 系列的 UHPLC 色谱柱中，分为快速高通量分离（RRHT）和超高压快速高分离度（RRHD）两个系列，高压力耐受分别为 600bar 和 1200bar。ZORBAX Plus C18 和 SB C18 RRHD 是中药配方颗粒中常用 UHPLC 色谱柱。本实验选用的色谱柱 ZORBAX Eclipse Plus C18 RRHD，其固定相表面通过致密键合和双封端处理，对中药中生物碱、皂苷、黄酮、萜类等成分具有优异的峰形和分离度。

根据国家药品监督管理局 《国家药品标准》中淡竹叶配方颗粒的检测项目，对其特征谱图和含量测定都采用 UHPLC 方法。特征谱图测定中要求理论板数按异荭草苷峰计算应不低于 10000，供试品呈现的特征峰保留时间应与对照品相对应。含量测定中规定了理论板数按异荭草苷峰计算应不低于 10000。本文采用 1290 Infinity II 超高效液相色谱仪以及 ZORBAX Eclipse Plus C18 RRHD, 2.1x100mm, 1.8μm 色谱柱对淡竹叶配方颗粒的特征谱图进行了分析，并对淡竹叶配方颗粒中异荭草苷的含量进行了测定。此外，我们也对该方法进行了加速，能够实现更快速的分析。

图1. 淡竹叶配方颗粒标准对照谱图与替代方法中供试品特征谱图(包括标准方法和加速方法)的比较 （峰 2(S):异荭草苷；峰 3:日当药黄素）

色谱条件：

标准方法：

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流动相：A：乙腈；B：H₂O（0.2%磷酸）

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梯度：0-4 min，95 %-92%B；4-25 min，92%B-85%B；25-30min，85-25 %B；后运行，7min

✓

流速：0.25ml/min

✓

柱温：40 °C

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检测波长：350 nm(4nm), Ref: off; 采样频率：20Hz

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进样量：1 μL

加速方法：

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梯度：24 min，95 %-92%B；2-12.5 min，92%B-85%B；12.5-15min，85-25 %B；后运行，3.5min

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流速：0.5ml/min

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其余同上。

系统适用性结果见下表：

结果

1）使用 ZORBAX Eclipse Plus C18 柱，能准确定位标准中要求的 4 个特征峰，且相对保留时间（RRT）在标准要求范围内。

2）标准方法和加速方法的理论板数按京异荭草苷峰计算分别为 124514 和 94893，大于规定值 10000，结果符合要求。

3） 使用加速方法加速分析后，分析结果符合标准要求，且分析时间缩短至原来的 50%。

2

含量测定

实验结果

图2. 淡竹叶配方颗粒供试品含量测定标准方法和加速方法谱图对照

色谱条件：

同特征图谱标准方法和加速方法。

系统适用性结果见下表：

结果

1）使用该方法测定异荭草苷的含量，其理论板数符合标准规定。

2）通过提高一倍流速，可加速分析方法，提高检测效率(50% 时间节省)。

实验结论

本实验选用 ZORBAX Eclipse Plus C18 色谱柱对淡竹叶配方颗粒特征谱图及含量进行了检测，均符合标准要求。原方法流速较低（0.25ml/min），分析时间较长。通过提升流速，分析效率提高 1 倍，且相对保留时间、系统适应性试验结果*要求。

仪器系统及色谱柱推荐

1290 Infinity II 四元 UHPLC 系统：全能泵(G7104A)，自动进样器(G7129B)，柱温箱(G7116B)，DAD(G7117A)

其它详细操作可以参考 Agilent 配方颗粒图谱集，或联系 Agilent。