实时荧光定量PCR扩增是指在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光集团，利用荧光信号来实时监测整个PCR进程，然后通过标准曲线对未知模板浓度进行定量分析。

 

　　病原学检测是动物疾病确诊的关键点，而聚合酶链式反应（PCR）是目前病原检测的常用的分子生物学技术，具有高敏感性的特征。PCR技术发展已日趋完善，并在此基础上建立了实时荧光定量PCR、套式、多重、降落PCR等技术，逐渐成为实验室常规检测手段。

 

　　实时荧光定量PCR扩增是指在PCR扩增反应体系中加入荧光基团，通过对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

 

　　荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，可以选择在这个阶段进行定量分析。为了方便定量和比较，在实时荧光定量PCR技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和CT值。

 

　　荧光定量PCR的分类：

 

　　分为核酸染料法和探针法。核酸染料法实验设计简单，不需要设计探针，仅需要一对引物，但是核酸染料法对双链的结合并没有特异性，容易使实验结果出现假阳性信号。

 

　　动保站全部采用探针法，此方法只有与探针结合的片段上发生扩增才能收集到荧光信号，增加了反应的特异性；另外如果对探针的5’端采用不同的荧光标记就可以进行多重荧光定量PCR。