MchanoCulture B1应用举例：双轴力学刺激椎间盘细胞

 CellScale生物力学设备细胞牵张拉伸仪

MechanoCulture B1用于为细胞培养物提供多轴拉伸刺激。在这项研究中，刺激小鼠椎间盘（IVD）细胞以研究基因表达的变化。

椎间盘（IVD）是复杂的结构，对于脊柱稳定、承重和运动至关重要。它由三个截然不同但相互依存的组织组成：中央髓核（NP）、纤维外环（AF）和锚定于椎骨的软骨终板。尽管生理负荷对椎间盘稳态至关重要，并刺激增加的细胞外基质合成，但过度负荷会引起一系列不可逆的反应。

细胞介导的反应导致组织结构和功能的破坏。机械负荷对IVD不同细胞类型的作用之间的差异了解甚少，调节这些反应的细胞途径也是如此。使用高密度微团细胞培养物培养原代小鼠IVD细胞可以维持AF表型。使用MechanoCulture B1设备将细胞暴露于环状多轴应变后，这种细胞培养策略可用于获取AF细胞基因表达的变化。

力学刺激

初始接种后二十四小时，对细胞进行机械加载。该协议是在1 Hz下双轴拉伸膜30分钟，10％应变。作为对照，使用无菌膜将用于对照的样品用无菌镊子转移至6 cm细胞培养皿中，并进行同样的预处理和接种。这些对照样品可使用户能够监控比较细胞生长、细胞活力和形态。

刺激后第6和24小时收获培养物用于RNA提取和基因表达分析。在拉伸序列之后，拉伸组件被拆开。小心地将膜从固定销上取下，并放入6cm的培养皿中。立即使用相差显微镜对活细胞的形态进行成像。为了收获细胞，将1mL PBS直接添加到膜的顶部，并使用细胞刮刀分离细胞。将PBS中的细胞离心以获得细胞沉淀。随后将细胞沉淀物悬浮在1mL Trizol中，用于随后的RNA提取和基因表达分析。

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