功能性的维生素-D主要包括维生素-D3和维生素-D2。维生素-D 除了具有传统意义上的骨骼效应，它还有着广泛的非骨骼效应，与心血管疾病、免疫疾病、糖尿病、肿瘤等疾病密切相关。25-羟基维生素-D（25OHD）测定是衡量维生素-D 营养状态的最佳指标。根据测定原理不同，目前 25OHD 的测定方法可分为多种，液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）具有特异性强、准确性高的特点，被认为是评价维生素-D 营养状况的“金标准”测定法，美国NIST的SRM972a标准参考物质用于测定的校准品。

通过测定 25OHD 浓度来评价维生素-D 水平，现有多种方法用于临床 25OHD的测定，根据方法原理，可分为酶免疫分析法和色谱法。由于所有的维生素-D羟化物都可能发生抗体抗原结合反应，因此酶免疫分析法只能测定 25OHD 总量，无法同时测定 25OHD2和 25OHD3的浓度。现有 25OHD 的色谱分析方法包括高效液相色谱法（HPLC）和液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）。由于可分离并检测不同的分析物，色谱法可区分并能分别定量 25OHD2和 25OHD3。

色谱法可将 25OHD2、25OHD3与维生素-D其他代谢物实现有效分离，提高检测特异性。HPLC 是早期应用较多的色谱法之一，可同时检测 25OHD2和 25OHD3，具有良好的精密度，与 LC-MS/MS 法结果一致性较好。与免疫法相比，HPLC的相对不确定度小，分析成本更低，甚至还有 HPLC 商业试剂盒用于 25OHD的测定。但是 HPLC 的不足之处是分析时间长、检测通量小、灵敏度低、所需样品量大，不适合临床应用，已经*被 LC-MS/MS 所替代。

LC-MS/MS 是色谱法中最为常用的 25OHD 检测方法，样品经处理后采用液相色谱分离，检测器为串联质谱仪，在多反应监测扫描模式下，实现分子离子和碎片离子两次质量选择，可同时检测 25OHD2和 25OHD3，具有非常高的检测特异性，被认为是“金标准”的检测技术。LC-MS/MS 更加契合现代临床实验室的工作流程，可*临床检测方法准确性、特异性、检测通量的要求。25OHD 的 LC-MS/MS检测方法都是实验室内部开发的，不同的实验室采用不同的标准品来源、贮备液配制、样品处理方法等，影响了室间可比性。

而采用共同的校准品、参加英国维生素-D 代谢物室间质评计划(DEQAS)、美国病理学家协会（CAP）的能力测试等措施有助于改进方法间、实验室间测定结果的可比性：美国标准技术研究（NIST）所提供血清 25OHD2和 25OHD3的SRM972a标准参考物质，采用 LCMS/MS 测定靶值。2009 年 DEQAS 有 35 国家、670 家实验室参加，目前我国尚无相应的 25OHD 的室间质评计划。