【应用实例】皖仪科技液相色谱仪对尿酸、腺苷、肌苷的测定
时间：2023-05-05 阅读：509
引言
由于与宿主的健康及疾病密切相关，肠道菌群组成的分析已成为健康科学领域的重点研究目标。自1998年起，福州大学生物工程研究所的谢俊斌等[1]人相继致力于液相色谱技术分离、分析细菌细胞的可能性。此后，陈强、赖伟萍、陈萍、林娟等[1]人应用高效液相色谱技术在细菌分离分析方面做了大量相关的研究。这些成果表明该技术作为细菌分离、分析的有效手段，不仅能够分离不同种属的细菌，而且对于处于不同生长阶段、具有不同理化性质的细菌都能够实现分离。
其中，高尿酸血症是人体内血尿酸含量显著高于正常水平的代谢性疾病[2]，利用益生菌降解食物中外源性嘌呤类成分成为治疗高尿酸血症的新方法[3]。因此，利用HPLC从多株实验菌株中筛选降解核苷酸(腺苷酸、鸟苷酸)、核苷(腺苷、鸟苷)、嘌呤(黄嘌呤、次黄嘌呤、鸟嘌呤)、尿酸能力最强的益生菌具有重要作用[4]。
本方法是用LC3200系列产品（二元泵+UV+自产色谱柱）对菌群实验过程中的尿酸、肌苷、鸟苷进行有效检测及分离。
皖仪科技应用方案
仪器配置
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1.测试条件
仪器：液相色谱仪LC3200系列配有UV检测器；
色谱柱：皖仪自产WD-C18柱， 4.6×250mm, 5μm ；
柱温：30℃；
流速：0.8mL/min；
进样量：10μL；
检测器：UV检测器；
检测波长：254nm；
流动相：磷酸盐缓冲液，PH=3.2；
2.试剂及实验材料
磷酸二氢钾、四丁基硫酸氢铵；
一次性注射器（0.5-2mL）；
水系针式过滤器（0.22μm）；
3.标样制备
发酵液过0.22μm的滤膜，待测
4.测定方法
在上述测试条件下，待仪器稳定后，按照标样溶液、试样溶液进行上机测试。
测试结果
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1.对照品的测试
1.1尿酸对照
1.2腺苷、肌苷对照
由上图可知，本方法对尿酸、腺苷、肌苷能有效的分离检测。
2.样品检测分析
2.1尿酸样品
2.2腺苷、肌苷样品
总结
本次试验采用HPLC法检测菌群代谢液中尿酸、腺苷、肌苷,方法简便、快速、准确,该方法具有良好的应用前景，可以作为菌群移植、生物菌株等相关应用分析。
参考文献：
[1] 液相色谱技术在辅助肠道菌群分离、分析中的应用基础研究；
[2] 降血尿酸益生菌株的筛选和对高尿酸血症模型大鼠作用机理的探索；
[3] 中山市横栏地区高尿酸血症患者实施多学科团队健康教育的效果研究；
[4] 绿球藻胞外多糖的提取和体外活性研究。