皖仪科技离子色谱农药检测应用方案

引言

氨基寡糖素，是一种农业专用的壳聚糖，一种以β-1,4-糖苷键连接而成的低聚壳聚糖，一般含有 2-10 个氨基葡萄糖。它是从海洋生物如虾类、蟹类的外壳提取而来，是天然糖中唯一大量存在的、碱性的氨基寡糖，具有水溶性好、安全无毒、易吸收等特点。与传统化学农药不同，氨基寡糖素作为一种植物免疫诱抗剂，直接作用于植物，使植物获得抗逆病虫和增产的作用，可运用在果树、烟草、蔬菜等粮食作物。作为一种新型的生物绿色农药，氨基寡糖素具有高效、低成本、环境相容性好、安全性高等特点，对我国农业的可持续发展具有重要意义。

目前测定氨基寡糖素含量的方法有分光光度法、离子色谱法。分光光度法，由于氨基寡糖素本身没有发色团，紫外吸收十分弱，样品处理时需衍生，操作繁琐，且衍生后样品溶液不稳定，溶液吸光度会随着时间的变化而变化，数据的重现性差等问题，因此这一方法应用受到限制。离子色谱法，被用作为仲裁法，配置安培检测器，可方便、快速完成游离氨基寡糖素和氨基寡糖素总量的测定，具有重要意义。本文将介绍皖仪科技离子色谱仪搭配安培检测器在氨基寡糖素测试方面的应用，以供参考。

1 实验方法

1.1 色谱条件仪器：

      皖仪科技IC6300系列离子色谱；

n  1.1.1鉴别试验/游离氨基葡萄糖质量分数的测定

分析柱：糖分析专用柱（4×250mm）

保护柱：糖分析专用柱（4×50mm）

淋洗液：氢氧化钠与乙酸钠盐溶液

进样量：25μL

柱温：30℃

检测模式：积分脉冲—金电极 糖类 四电位

n  1.1.2 氨基寡糖素质量分数的测定

分析柱：糖分析专用柱（4×250mm）

保护柱：糖分析专用柱（4×50mm）

淋洗液：氢氧化钠与乙酸钠盐溶液

进样量：25μL

柱温：30℃

检测模式：积分脉冲—金电极 糖类 四电位

1.2 试剂及实验材料

D-氨基葡萄糖盐酸盐（≥99%）；

50%氢氧化钠溶液（分析级）；

无水乙酸钠（≥99.9%）；

一次性注射器（0.5-2mL）；

水系针式过滤器（0.22μm）；

去离子水，18.25兆欧；

盐酸（优级纯）氢氧化钠（99.9%）

1.3 样品前处理

n  1.3.1 鉴别试验/游离氨基葡萄糖质量分数的测定

标准品测试：准确称取30mg（精确至0.0001g）质量的D-氨基葡萄糖盐酸盐，置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，超声震荡5min。冷却至室温，摇匀。移取上述溶液1.0mL于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。配置好的样品按照1.1.1色谱条件进行测定。

样品测试：精密称取样品约120mg（精确至0.0001g）于200mL容量瓶，用水稀释至刻度，超声震荡5min，随后将样品稀释十倍，过0.22μm滤膜后进样分析。配置好的样品按照1.1.1色谱条件进行测定。

n  1.3.2 氨基寡糖素质量分数测定

标准品测试：准确称取30mg质量的D-氨基葡萄糖盐酸盐（精确至0.0001g），置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，超声震荡5min。冷却至室温，摇匀。移取上述溶液5.0mL于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。配置好的样品按照1.1.2色谱条件进行测定。

样品测试：精密称取样品约30mg（精确至0.0001g）于耐压烧瓶，加入10mL 8mol/L的盐酸溶液，充分混匀后充入高纯氮气并密封，98℃由于下搅拌8h。冷却至室温，打开后，缓慢加入8mol/L氢氧化钠溶液调节水解液的pH值到7.0。再将水解液转移到100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，超声震荡5min，冷却至室温，摇匀。用移液管移取上述溶液5.0mL至100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜后直接进样分析。配置好的样品按照1.1.2色谱条件进行测定。

2 测试结果

2.1 鉴别试验/游离氨基葡萄糖质量分数

n  2.1.1 标准品/样品测试

由于氨基寡糖素中主要对植物起作用的是低聚寡糖，在鉴别试验中，氨基寡糖素需至少含有壳二糖至壳六糖中的两个或者多个，且氨基葡萄糖含量不可超过一定数值，否则将被判定为不合格产品。因此鉴别实验需将氨基葡萄糖与壳二糖至壳六糖分离。但由于各个壳寡糖之间性质较为相似，分离难度较大。

本次试验中，我们将壳二-壳七糖与氨基葡萄糖混合标准品，以及样品按照“1.1.1”色谱条件进行测试，其测试谱图如图1所示。标准品与样品中氨基葡萄糖与壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖、壳六糖、壳七糖标准品分离度良好。并且在样品中检测出壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖、壳六糖、壳七糖六种糖。且本次测试样品中游离氨基葡萄糖测试含量为0.3%，低于标准的限定要求0.5%，为合格样品。

   图1 壳二-壳七糖与氨基葡萄糖标准品分离测试谱图

            图2 样品测试谱图

n  2.1.2 重复性测试

按照“1.1.1”色谱条件，将氨基葡萄糖标准品连续进6针，得到的色谱图和重复性数据分别见图3、表1，结果表明，定性和定量重复性数据良好。

         图3 氨基葡萄糖重复性测试谱图

        表1 氨基葡萄糖重复性测试数据

2.2 氨基寡糖素质量分数测定

n  2.2.1 标准品/样品测试

将氨基葡萄糖标准品与处理好的样品（处理方法见1.3.2）按照“1.1.2”色谱条件进行测试，结果见图4、图5。经计算，氨基寡糖素质量分数为97%，高于最低限度90%，高于标准要求，为合格样品。

        图4 氨基葡萄糖标准品测试谱图

            图5 样品测试谱图

n  2.2.2 重复性测试

按照“1.1.2”色谱条件，将氨基葡萄糖标准品连续进6针，得到的色谱图和重复性数据分别见图6、表2，结果表明，保留时间和峰面积重复性数据良好。

         图6 氨基葡萄糖重复性测试谱图

         表2氨基葡萄糖重复性测试数据

3 总结

本文采用皖仪科技离子色谱6300系列配置安培检测器，对游离氨基寡糖素和氨基寡糖素总量的测定，测试结果良好，准确性高，完全满足离子色谱法检测氨基寡糖素的测试要求。