诺谱新材料甲烷磺酸体系阳离子色谱柱测定乳粉中的胆碱

摘要：胆碱由 Adolph Strecker 于1849年从猪胆汁中分离得到，故又名胆素，直至上世纪三十年代才逐步明确其营养价值和作用。胆碱在食品领域主要应用于在婴幼儿配方食品和孕妇妊娠期及哺乳期食品中，是婴幼儿配方食品中必须添加的一种营养物质。人体内胆碱的主要源自于自身合成和食物获取，一般不会出现胆碱缺乏，但对于婴幼儿来说，其自身合成胆碱的能力有限，特别是在母乳不足的情况下，其机体所需胆碱的来源主要是婴幼儿配方食品，故对婴幼儿配方食品中胆碱含量的监测具有重要意义。胆碱是碱性强度与氢氧化钠相似的一种含氮的有机碱性化合物, 在水溶液中可以完全电离。所以可以采用离子色谱法, 用阳离子交换柱测定胆碱的含量。本篇文章采用诺谱新材料甲烷磺酸体系阳离子MS-5C-P2型色谱柱对胆碱进行测试，方法线性良好, 重复性稳定, 适合奶粉中胆碱含量的日常检测。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

离子色谱仪：IC6200系列，配备电导检测器、阳离子抑制器、自动进样器AS3110系列，皖仪科技公司。

分析柱：MS-5C-P2,4.6×250 mm,5μm，诺谱；

保护柱：MS-5CG，4×30 mm，诺谱；

胆碱标准工作溶液：100mg/L；

一次性注射器（5mL）；

水系微孔滤膜（0.45μm）；气：高纯氮气（>99.99%）；浓盐酸（HCl）；甲烷磺酸溶液：15mmol/L；C18固相萃取小柱；

1.2 溶液配制

1.2.1 系列标准工作溶液

依次精密移取胆碱标准工作溶液（100mg/L）0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL于一组100mL容量瓶中，用15mmol/L甲烷磺酸溶液定容，摇匀，配制成胆碱的质量浓度分别为下表的系列标准工作溶液。

标准曲线系列浓度梯度

1.2.2 检出限溶液配制

精确移取胆碱标准工作溶液（100mg/L） 0.02mL于100mL容量瓶中，用15mmol/L甲烷磺酸溶液定容，摇匀，配制成胆碱的质量浓度为0.02mg/L标准工作溶液。

1.3 仪器工作条件

色谱柱：诺谱MS-5C-P2 ,4.6×250 mm,5μm；

保护柱：诺谱MS-5CG,4×30 mm；

色谱柱温度：40 ℃；

电导池温度：45 ℃；

淋洗液：26mM MSA ；

流速：1.0 mL／min ；

抑制器电流：78mA ；

进样体积：100 μL。

1.4 样品前处理

准确称取2.5g（精确至0.0001g）半固态或固态试样于50mL比色管中，加入1mol/L的盐酸溶液25mL，加盖，涡旋至试样溶液中无结块，混匀后放入70℃±2℃水浴中水解3h（每30min摇一次）。将水解液冷却至室温，转移至50mL容量瓶并用水定容至刻度，混匀待用；将样品稀释适当倍数后采用过C18固相萃取柱处理及滤膜后进行检测。

2 结果与讨论

2.1 分离度验证

在1.3仪器工作条件相同的条件下，对混合标准溶液进行测定，得到7种阳离子标准色谱图如图1所示。由图1及表1可知，7种离子峰形对称，形状尖锐，各组分分离度良好。

图1  7种离子混合标准溶液检测谱图

表1 7种离子混合标准溶液检测结果

2.2 标准曲线线性验证

将1.2.1中配制的标准曲线系列工作溶液于系统中，按

照1.3工作条件进行分析，得到标准曲线谱图多点重叠谱图如图2，线性图见下图3，线性相关系数R为0.99981，线性良好。

图2  胆碱标准溶液线性重叠谱图

图3 胆碱线性

2.3 检出限验证

当固态或半固态试样称样量为2.5g时，方法检出限为0.02mg/L，按照1.2.2中配制的胆碱标准工作溶液进行分析，样品的测试结果见下图4及表2，理论检出限优于标准方法检出限；

图4 最低检测浓度测试谱图

表2 最低检测浓度测试数据

2.4 重复性验证

按照1.4样品前处理方法的得到的样品重复6次分析，测试谱图及数据见下图5及表3，保留时间的RSD值为0.132%，峰面积的RSD值为0.211%；

图5 样品重复性测试谱图

表3 样品重复性测试数据

2.5 样品检测

样品1：甄选配方羊奶粉在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值为算数平均值的1.04%，小于标准要求的10%。

图6 样品1测试谱图

表4 样品1测试数据

总结：根据谱图和数据显示，采用皖仪诺谱甲烷磺酸体系阳离子MS-5C-P2色谱柱进行测，定性定量重复性良好，分析结果稳定，测试条件可以应用于数据检测。

3 结论

本次采用皖仪科技离子色谱仪IC6200系列及诺谱甲烷磺酸体系阳离子MS-5C-P2,4.6×250mm,5μm型色谱柱对GB5413.20-2022食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定进行系统适用性、标准曲线验证、检出限验证、分离度验证、重复性验证，测试结果峰型较好，线性良好，分离度较好，重复性满足要求，灵敏度高，完全满足国标GB5413.20-2022食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定的测试要求。