问题：                                      

不同色谱柱间差异  
使用期间柱变化  
原因：    
填料、键合不相同  
柱床破坏  
键合相丢失  
硅胶基质溶解  
强保留组分堆积堵塞  
表现：  
保留因子（k)，分离因子（α)  
柱效（N)  
保留因子（k)，分离因子（α)  
柱效（N)  
保留因子（k)，柱效（N)  
问题：   
柱外效应  
原因：  
系统差异、进样量大、进样阀与色谱柱之间、色谱柱与检测器之间的管路太长、检测器流通池体积大、接头死体积大等。   
表现：  
柱效（N）  
问题：  
分离效果变差   
原因：  
流动相组分改变  
流速改变  
温度改变  
表现：  
保留因子（k)，柱效变化很小  
保留因子（k)，分离因子（α）  
保留因子（k)，柱效变化很小  
问题：  
柱平衡慢  
原因：  
重新平衡时间不够   
柱超载 样品量太大   
表现：  
保留因子（k)，柱效变化很小  
保留因子(k)，柱效(N)  
造成色谱峰（ 不对称）拖尾的原因  
1．色谱柱本身填装问题，筛板堵塞或填料塌陷；  
2．柱头有污染；  
3．样品超载；  
4．样品溶剂不合适；  
5．柱外效应；  
6．化学或二次保留（硅羟基）效应；  
7． 缓冲容量不足或不合适；  
8． 重金属污染。  
如何解决峰形拖尾的问题  
A. 与化学有关的拖尾问题  
1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用于碱性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知化合物加醋酸三乙胺；  
2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；  
3.降低进样量至<1μg。  
B. 与色谱柱有关的拖尾问题  
1.如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二氯甲烷与4%甲醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗；正向柱可用甲醇冲洗；  
2.使用保护柱。  
C. 与HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽  
1.进样体积过大，（通常≤25μL）；  
2.进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（连接管应<20cm，内径为0.007"）；  
3.检测器流通池的体积过大。