大家有没有试过，把培养基冻起来，颜色会有变化吗？颜色一开始变黄！解冻以后，又会慢慢变红！为什么呢？

如果冻的液体是水，或是缓冲液，颜色会有变化吗？

并不会有变化！

原因是因为，培养基中会加入酸碱指示剂，例如酚红，用于检测培养基的酸碱性。当培养基酸性增加时，酚红会呈现黄色，当培养基碱性增加时，酚红会呈现红色。

在细胞培养过程中，细胞代谢会产生酸性代谢产物，使培养基酸性增加，因此培养基会逐渐变黄。当培养基解冻后，酸性代谢产物逐渐消耗，培养基的酸性减少，导致酚红颜色逐渐变回红色。

如果冻结的液体是水或缓冲液，一般不会出现颜色的变化。这是因为水和缓冲液不含有酸碱指示剂，所以当其冻结和解冻时，颜色不会发生变化。

为什么细胞培养基冷冻以后，会变酸呢？

细胞培养基冻结后变酸的原因是由于冰冻过程中，液体中的二氧化碳和其他气体会逸出。冰结过程中，水分子会有序排列形成晶体，气体无法溶解在冰中，因此逸出。培养基中二氧化碳的减少会导致酸碱度的变化，使培养基变酸，从而导致培养基的颜色变黄。

培养箱的CO2浓度为什么要设置5%？

培养箱的CO2浓度设置为5%是为了模拟细胞/组织在生物体内的生长环境，并提供适合细胞体外培养的条件。培养箱要求稳定的温度、CO2水平、酸碱度和湿度，其中CO2浓度的稳定性对细胞培养非常重要。

以常用的细胞培养基DMEM为例，其碳酸氢钠浓度为1.5g/L。厂家已经测试好对应的培养箱浓度在5%左右，假如该培养基碳酸氢钠浓度变为3g/L，则培养箱CO2浓度应维持在10%。

国外常用的培养条件就是，1升培养基里含3克NaCO3，CO2培养箱的浓度是10%。而国内大多数是5%的浓度，相对应的培养基内碳酸氢钠浓度就在1.5g/L左右。