蛋白定量是蛋白分离和分析前必须的一个重要步骤，蛋白色谱分离、蛋白质电泳分析、蛋白质免疫分离和分析、细胞裂解释放的总蛋白定量、蛋白分子的标记、蛋白结构分析等，都需要可靠的定量分析作为基础。蛋白定量分析应用的领域包括生物科学，食品检验，临床检验等等。蛋白质定量有哪些方法？让我们一起来看看吧！

一、比色法

蛋白定量常使用的方法是比色法，通常用于总蛋白的定量分析。根据蛋白和比色试剂的结合，可以将比色法分为：蛋白-染料结合法和蛋白-铜螯合化学试剂法。前者对应的典型蛋白定量比色法是考马斯亮蓝G250染料结合法，后者则包括双缩脲法，Lowry法，二喹啉甲酸（BCA）法。

1、Bradford法

Bradford法也称作考马斯亮蓝法，是由Bradford于1976年建立的。该方法的原理是蛋白在酸性条件下和考马斯染料结合，染料的最大吸收值发生改变，从465nm转移为610nm，并且在595nm处有最大的吸收差异。结合到蛋白质分子上的染料数与蛋白所带正电荷成正比，因此可以用该方法来对蛋白进行定量。染料的颜色变化和蛋白中的碱性氨基酸（精氨酸、赖氨酸和组氨酸）有关，另外范德华力和疏水作用也会影响蛋白与染料的结合。

2、 BCA法

BCA (bicinchonininc acid) 1985年Paul K. Smith等人开发出BCA方法，该方法分为两步：首先，在碱性条件下，蛋白将二价铜离子还原为一价铜离子，然后，BCA和一价铜离子结合，形成紫色化合物，该化合物在562nm时有最大吸收，且吸收值与蛋白浓度呈线性相关。

二、紫外法

紫外法也是常用的蛋白定量方法之一，该方法在简单的分光光度计中就可以定量测定溶液中蛋白质的含量。蛋白质对近紫外光的吸收依赖于酪氨酸（Tyr）和色氨酸（Trp）含量，同时在很小的程度上也会受到苯丙氨酸（Phe）和二硫键数量的影响。因此，蛋白质之间A280的吸收值相差很大，对于浓度为1 mg/mL的溶液，从0到4的数值都有，大多蛋白的吸收值在0.5 - -1.5的范围之间。

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