产品名称：NEB Q5定点突变试剂盒-不含感受态细胞(E0552S)现货供应

产品货号：E0552S

产品品牌：NEB

产品简介：

Q5定点突变试剂盒（不含感受态细胞）可以在2小时内快速对双链质粒DNA进行定点突变。该试剂盒使用稳定的Q5热启动超保真DNA聚合酶，结合客户自行设计的引物，在各种质粒中引入插入、缺失和替换突变。PCR后将扩增材料直接添加到du特的激酶-连接酶-DpnI（KLD）酶混合液中，进行快速室温环化和模板去除（5分钟）。将质粒转化到高效级E.coli感受态细胞（不随试剂盒提供），以确保转化长度至少为20kb的质粒能获得稳定的结果。也提供含感受态细胞的试剂盒

实验数据：

使用预混液、du特的多酶 KLD 酶混合液和快速聚合酶可确保大多数质粒的突变反应在两小时内完成。

注意事项：

1.如果得到的质粒不包含所需的突变（野生型序列），建议在PCR步骤中使用≤10ng的模板。另外，也可将KLD温育时间延长至30-60分钟来减少野生型质粒的背景。

2.如果没有菌落或菌落很少，请确保引物设计正确。除引入缺失外，设计的两条引物的5´末端应背靠背对齐，以利于进行指数扩增。为得到最佳结果，推荐使用NEB在线引物设计软件NEBaseChanger™设计引物并计算退火温度。

3.如果没有PCR产物或产物很少，请确保使用了最佳退火温度（Ta）。高保真聚合酶适合Tm+3退火温度。使用NEB在线引物设计软件NEBaseChanger™计算Ta。另外，可以使用梯度PCR和琼脂糖凝胶分析来确定最佳退火温度。

产品选购：

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