产品名称：索莱宝Solarbio小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒(P8860)现货供应

产品货号：P8860

产品品牌：索莱宝

产品简介：

产品组成:

实验流程：

淋巴细胞分离方法（仅供参考）

1. 制备脾脏的单细胞悬液。

2. 取一支适当的离心管，加入与脾脏单细胞悬液等量的分离液（分离液最少不得少于3 mL，总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果）。

3. 小心吸取单细胞悬液加于分离液液面上，注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取单细胞悬液，然后小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。）

4. 室温，水平转子500~900g，离心20~30min。（根据脾脏单细胞悬液的量确定离心条件，单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件可以自行摸索，以达到最佳分离效果）。

5. 离心后，此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层为稀释液层；第二层为环状乳白色淋巴细胞层；第三层为透明分离液层；第四层为红细胞层。

6. 用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞至另一洁净的 15mL离心管中，向离心管中加入10ml细胞洗涤液洗涤白膜层细胞，250g，离心10min。

7. 弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心 10min。

8. 重复步骤7

9. 弃上清，细胞重悬备用。

脾脏单细胞悬液的制备方法（仅供参考）

脾脏研磨的方法：

1. 无菌条件下摘取脾脏，撕去脾脏被膜，用眼科剪将脾脏剪成小块。

2. 将尼龙筛网或者是细胞过滤筛放置于平皿上，加入少量全血及组织稀释液（保证脾脏及获得的细胞处于液体环境中）。

3. 将脾脏放置于筛网上，使用注射器活塞或者是无菌镊子来研磨脾脏（尽量控制研磨力度，保持筛网悬空，避免在皿底上直接研磨而造成大批细胞死亡）

4. 研磨后使用全血及组织稀释液冲洗筛网，收集细胞悬液，再经滤网过滤。

相关文献：

[1] Yuying Liu,Xiaoyu Liang,Wenqian Dong,et al. Tumor-Repopulating Cells Induce PD-1 Expression in CD8+ T Cells by Transferring Kynurenine and AhR Activation. Cancer cell. March 2018. (IF 23.916)

[2] Qiushuang Zhang,Chao Xie,Dongyu Wang,et al. Improved Antitumor Efficacy of Combined Vaccine Based on the Induced HUVECs and DC-CT26 Against Colorectal Carcinoma. Cells. May 2019. (IF 5.656)

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