琼脂糖凝胶电泳的原理
时间:2024-10-08 阅读:135
一、琼脂糖凝胶
琼脂糖是一种从红藻中提取的天然线性聚合物,其基本结构是由D-和L-半乳糖残基通过α(1→3)和β(1→4)糖苷键交替连接而成的长链。琼脂糖在水中加热溶解后,冷却时能形成半固体状的凝胶。制成的小颗粒用于凝胶过滤。适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤,若使用5%以下浓度的凝胶,也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点,有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降反应的支持物。琼脂糖凝胶具有多孔性,其孔径大小与DNA分子的双螺旋直径相当,这使得它成为理想的分离介质。此外,琼脂糖凝胶具有亲水性,且几乎不存在带电基团,因此对生物大分子极少引起变性和吸附,是理想的惰性载体。
二、电泳原理:
1.电荷效应:
DNA分子在碱性条件下(pH>7)会电离,带负电荷。当DNA样品置于电场中时,会受到电场力的作用,向正极方向移动。DNA分子的迁移速率与其所带的电荷量成正比,而电荷量又与DNA片段的长度成正比。因此,在相同电场条件下,较长的DNA片段迁移速率较慢,而较短的DNA片段迁移速率较快。
2.分子筛效应:
分子筛效应的原理基于分子筛的多孔结构。分子筛晶体具有蜂窝状的结构,晶体内的晶穴和孔道相互沟通,并且孔径大小均匀且固定(分子筛空腔直径一般在3—15埃之间),只有那些直径比较小的分子才能通过沸石孔道被分子筛吸附,而构型庞大的分子由于不能进入沸石孔道,则不被分子筛吸附。这种根据分子大小和形状的不同选择吸附的现象,就是分子筛效应。
琼脂糖凝胶由琼脂糖分子交联形成的网状结构,其孔径大小与琼脂糖浓度成反比。当DNA分子通过凝胶时,会受到凝胶孔径的阻碍。较小的DNA片段可以通过凝胶孔隙,而较大的DNA片段则会被阻挡,导致迁移速率降低。这种分子筛效应使得琼脂糖凝胶电泳能够有效地分离不同大小的DNA片段。
三、琼脂糖凝胶推荐
货号 | 产品名称 | 规格 |
310101-1G | 1G;5G;250G;500G | |
340201-5ML | 5mL;50mL;1L | |
310201-1G | 1G;10G;100G |