原理

Trizol 试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和 SDS 的单相酸性溶液，其在裂解细胞的同时抑制 RNase 的活性，随后加入氯仿，酚会大量的溶解在氯仿中。由于 DNA 和 RNA 在酸性酚中的溶解性不同，造成 DNA 分布在下层的氯仿酚溶液中，RNA 则分布在上层的水相中，最后用异丙醇沉淀水相中的 RNA，并用 70% 乙醇洗涤沉淀，这样就可以得到比较纯净的总 RNA。

材料与仪器

动物组织、液氮、Trizol 试剂；

步骤

1、 先在研钵中加入液氮，再将组织剪成小块在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取 50-100 mg 组织粉末加入已盛有 1 ml 的 Trizol 液的 EP 管中（注意组织粉末总体积不能超过所用 Trizol 体积的 10%），充分混合均匀。

2、室温放置 5 min，然后加入 200 μl 的氯仿，盖紧 EP 管并剧烈摇荡 15 秒钟。

3、12, 000 rpm 离心 10 min，取上层水相于一新的 EP 管中（千万不要将中间的沉淀层和下层液混入，否则重新离心分离），加入 500 ul 异丙醇，温和颠倒混匀。室温放置 10 min，12, 000 rpm 离心 10 min。

4、小心地弃去上清液，加入 1 ml 的 75% 乙醇，涡旋混匀，4℃ 下 12, 000 rpm 离心 5 min。重复操作一次。

5、弃去上清液（尽量将残余液体除去），室温或真空干燥 5-10 min（注意不要干燥过分，否则会降低 RNA 的溶解度）。用 30 ul DEPC 处理过的水将 RNA 溶解，必要时可 55℃-60℃ 水浴 10 min。RNA 可进行 mRNA 分离，或贮存于 70% 乙醇并保存于 -70℃。

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