标曲显色过强无明显梯度

1、主要怀疑点：洗板不充分。

2、机器洗版：确保机器设置的针头能吸干孔中液体，并且加液针头能加液大于350ul，加液针头没有被异物或者结晶盐堵住。

3、手动洗板，严格按照步骤，使用干净灭菌的枪头和加样槽，使用无氧化剂的吸水纸。加350ul洗液，静置90秒，在吸水纸上拍干孔中液体后再加入下一步洗液或者试剂。

4、特别注意，在加入TMB前的洗板步骤极其重要，残留的HRP酶会直接导致TMB显色。

5、TMB 已经污染，检测TMB是否透明无色，如果偏蓝就是污染了。

6、检查配制洗液的水是否污染，要求使用的水是双蒸水，三蒸水或无离子水，水中的Fe3+,Cu3+,Co3+等过渡金属，以及HClO都会氧化TMB。

7、酶标板受潮，长霉，或者试剂过期。

8、环境污染，空气中有导致显色的物质或者粉尘。