流式荧光法（Flow Cytometry）在检测细胞因子时，为了定量分析细胞因子的浓度，通常需要建立一个标准曲线，该曲线是通过测量一系列已知浓度的标准品（通常是纯化的细胞因子）的荧光强度来建立的。选择合适的拟合模型可以确保标准曲线的准确性。然而在，流式荧光法中，细胞因子的浓度与荧光强度之间的关系往往是非线性的。这种非线性关系通常表现为S形曲线，即随着浓度的增加，荧光强度的增加速度会发生变化。常规的线性拟合无法准确描述这种非线性关系。目前大多数流式分析软件采用的是五参数逻辑回归（5PL），尤其是在使用流式荧光法等技术进行免疫检测时。5PL模型比够更灵活地拟合数据，尤其是在数据呈现非对称或非典型S形曲线的情况下。目前有很多流式分析软件（如FCAP)，都是采用这样拟合的方法做标准曲线。当有些场景没办法用软件计算时，该怎样做？下面我们来介绍如何使用origin软件的五参数逻辑回归拟合标准曲线。

1 在originPro软件中输入数据，X为浓度，Y为荧光强度

2 分析-拟合-非线性曲线拟合-打开对话框

3 对话框中 函数选择 Logistic，然后进行拟合

4 得到一系列分析数据后，找到拟合曲线图，并双击

5 双击后得到一个不怎么好看的曲线

6 将拟合曲线的X轴和Y轴都设置成log10

7 最后得到一条比较丝滑的，R的平方>0.99的标曲（在这里我们用到了5个浓度梯度做标曲，实际上用设置更多的浓度梯度会更好）。

8 在后续检测中测到的荧光可以代入到标准曲线拟合的公式中计算出靶标浓度。

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