免疫亲和柱技术

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一

首先来看下它的原理：

免疫亲和柱（immnuo affinity chromatography columns,IAC）是利用免疫亲和层析原理即利用生物大分子具有对某一类生物大分子特异识别和可逆结合的特性而制成，用以分析检测抗体或抗原的亲和层析柱。

二

其次，它的组成及其作用

一支完整的免疫亲和柱由以下六部分组成，其中：

柱管：分为1ml和3ml两种规格，不同规格的对应的柱容量不同；
固定相：琼脂糖凝胶；
包被在固定相上的抗体：琼脂偶联特异性抗体，为反应主体关键部分；
保护液：通常是缓冲溶液保持琼脂润湿；
筛板：孔径20um；
上下顶盖：主要是防止保护液流失。

三

接下来，怎么使用？

使用前先将亲和柱恢复至室温，放掉柱子的保护液，然后进行上样、淋洗、洗脱过程。

四

实验中小Tips：

1、上柱的样品溶液应该保持酸碱中性、无悬浮物、甲醇浓度不宜过高；

2、若样品为复杂样品，例如高蛋白、高油脂、酸性样品，可以将提取液分两次提取样品，可以提高提取效果；

3、样品过柱及甲醇洗脱速度要慢且均匀，约每秒1-2滴；

4、抗原抗体发生反应的最佳温度是在25℃左右，实验需要的环境温度最好是室温24℃-28℃ ，太高或太低的温度都会对亲和柱的回收率有一定的影响。亲和柱在使用前需要恢复至室温再进行实验；

5、亲和柱不要在无水状态下，琼脂容易干燥，影响亲和柱的质量；

6、亲和柱储存条件为4℃-8℃。切记0℃以下的低温，因为缓冲液冻结，会严重影响亲和柱内的物理结构，对亲和柱的质量影响很大；

7、洗脱一般选择试剂甲醇，为增强洗脱效果可加大甲醇体积；

8、样液免疫亲和柱净化后，洗脱液过0.45um或更小孔径滤膜效果更好。

附免疫亲和柱相关标准

食品标准

饲料标准

粮油标准

海关标准