IC50是一种测量化合物抑制生物学活性的常用方法，药物研发中的应用尤其广泛。IC50代表半最大抑制浓度，即一种化合物抑制特定生物学反应的能力，使其活性降低50%的浓度。这种生物学活性可以是酶的活性、受体的信号传导、细胞增殖或其他生物学效应。

IC50的测定通常通过在不同浓度的化合物溶液中进行生物学实验来完成。通过测量生物学效应的变化（例如酶活性或细胞生存率）并绘制浓度-响应曲线，可以确定IC50值。通常，IC50值越低，即化合物对生物学目标的抑制作用越强。

IC50在药物研发中具有多种应用。首先，它可以用来评估化合物对特定靶标的亲和力和选择性。较低的IC50值通常表示化合物对靶标具有较高的亲和力。其次，IC50还可以用来评估化合物的药理学效应，如药物对疾病相关酶的抑制作用。此外，IC50值还可以用来比较不同化合物之间的活性，以便进行药物筛选和优化。

尽管IC50的应用十分广泛，但是我们在自己的IC50测试过程中经常遇到测试结果与报道结果不一致的情况。实际上，IC50的差异是广泛存在的。

如，Pexidartinib vs CSF1R检测中，最常被报道的IC50值是20nM，但是其他的测试结果也同样被报道：

1.7 nM (doi.org/10.1016/j.bmcl.2022.128928)

2.7nM (doi.org/10.1016/j.cbi.2022.110255)

9.7nM (doi.org/10.1021/acs.jmedchem.3c00428)

文献中的测试方法是不一样的，以上的测试结果分别使用了分光光度法, Z-LYTE检测和LANCE TR-FRET检测。20nM的测试数值很可能是Plexxikon最先报道出来的，通过ChEMBL数据库查询，并没有给出详细的出处和测试方法。不同的测试方法所获得的IC50的数值是不一样的，甚至是数量级上的差别。

U0126 vs MKK1的IC50测试中，使用的截短的、构成活性的重组MKK1结构域，其IC50约为70 nM，使用细胞中分离的全长内源活化的野生型MKK1，其IC50约为500 nM。酶的结构，甚至翻译后修饰、氧化还原状态或部分降解产物同样会对IC50的测试结果产生极大影响。

下图分别显示底物浓度[S]、酶浓度[E] 对standard competitive, uncompetitive和non-competitive抑制中IC50检测的不同的影响。对更多的抑制类型的影响请参考原文。

此外，缓冲成分、pH值和离子强度也同样对IC50的检测有着不可预知的影响。

由于IC50数值的影响因素众多，自己实验室的IC50检测值很难与报道或其他实验室的IC50检测值进行直接比较。