RAW 264.7-LUC是一种常用的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系，广泛应用于免疫学、药理学和肿瘤学等领域的研究。该细胞系具有较高的增殖能力和稳定的遗传特性，是研究巨噬细胞功能和药物筛选的理想模型。本文将详细介绍RAW 264.7-LUC细胞的培养与鉴定方法。
 

　　一、细胞培养
 

　　培养基的选择：
 

　　RAW 264.7-LUC细胞通常在DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)培养基中生长。培养基中需添加10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素-链霉素溶液，以提供必要的营养和防止细菌污染。
 

　　细胞传代：
 

　　细胞传代是维持细胞生长的重要步骤。当细胞密度达到80%-90%时，需进行传代。首先，弃去旧培养基，用PBS(磷酸盐缓冲液)洗涤细胞一次，然后加入适量的胰蛋白酶溶液，轻轻摇晃培养瓶，使细胞脱离瓶壁。待细胞悬浮后，加入新鲜培养基终止消化，将细胞悬液转移至新的培养瓶中，继续培养。
 

　　培养条件：
 

　　RAW 264.7-LUC细胞应在37°C、5%CO2的恒温培养箱中培养。CO2浓度的维持有助于稳定培养基的pH值，促进细胞生长。
 

　　二、细胞鉴定
 

　　显微镜观察：
 

　　使用倒置显微镜观察细胞形态和生长状态。健康的细胞呈圆形或不规则形状，细胞质丰富，胞核清晰可见。若发现细胞变圆、浮起或出现大量碎片，则可能表明细胞状态不佳或受到污染。
 

　　细胞活力测定：
 

　　细胞活力测定是评估细胞健康状况的重要方法。常用的测定方法包括MTT法和Trypan Blue染色法。MTT法通过检测细胞内线粒体的还原能力来评估细胞活力；Trypan Blue染色法则通过染色死细胞，计算活细胞比例。
 

　　流式细胞术分析：
 

　　流式细胞术是一种高通量的细胞分析技术，可用于检测细胞表面标志物、细胞周期和凋亡等。通过对细胞进行荧光染色，结合流式细胞仪检测，可以获取详细的细胞信息。
 

　　基因表达分析：
 

　　通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)或Western Blot等方法，检测细胞中特定基因的表达水平，进一步确认细胞的特性和功能状态。
 

　　三、注意事项
 

　　无菌操作：
 

　　在细胞培养过程中，必须严格遵守无菌操作原则，避免细菌和真菌污染。所有操作应在超净工作台中进行，操作前需用75%酒精对手和器具进行消毒。
 

　　试剂质量：
 

　　细胞培养所用试剂和耗材应为高质量的生物制品，避免因试剂质量问题影响细胞生长和实验结果。
 

　　定期检测：
 

　　定期检测细胞生长状态和活力，及时发现并处理问题。建议每两周进行一次Mycoplasma检测，以防支原体污染。
 

　　RAW 264.7-LUC细胞作为一种重要的实验模型，其培养与鉴定方法的掌握对于相关领域的研究具有重要意义。通过合理的培养条件和严格的鉴定方法，可以确保细胞的稳定生长和实验结果的可靠性。