一、羊产气荚膜梭菌α毒素抗体检测试剂盒

通用名：羊产气荚膜梭菌α毒素抗体试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Alpha-Toxin gene of Clostridium Perfringens（ELISA）

二、包装规格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒

三、预期用途  

羊产气荚膜梭菌病是由产气荚膜梭菌（Clostridium Perfringens）引起的，该菌是动物生存环境中常见的一种梭菌, 它能分解有机质中的糖, 并产生大量气体和毒素, 导致动物机体组织坏死、中毒甚至死亡。感染羊后可引起羔羊痢疾、羊猝疽、肠毒血症等疾病，严重危害养羊业的发展。

羊产气荚膜梭菌α毒素抗体检测试剂盒用于检测羊血清中产气荚膜梭菌α毒素抗体，可用于羊三联四防疫苗免疫效果评价。

四、试剂盒原理

试剂盒由预包被产气荚膜梭菌α毒素蛋白抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测羊血清、血浆样本中α毒素抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有α毒素抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有产气荚膜梭菌α毒素抗体。

五、试剂盒组成

酶标板、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、阳性对照、阴性对照、终止液、稀释板、盖板膜

六、储存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期为12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按50倍稀释（如4μl血清加入196μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

注：样本稀释比例相当于1:50。

4.混匀，盖好盖板膜,置37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。

5.甩去孔内液体，每孔加350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。

6.每孔加酶标记物100μl，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜，37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照的平均OD值即ODNC应≤0.3，阳性对照的平均OD值即ODPC应≥0.6。