一卷膜6000+RMB？！还没有恢复实验应该怎么应对“膜慌”
时间：2020-04-09 阅读：538
实验室小贴士
用在免疫印迹中zui常规的膜的类型是硝酸纤维素膜（NC 膜）和聚偏氟乙烯（PVDF）膜。两者主要区别：
| 产品 | Biotrace NT 膜 | FluoroTrans W PVDF 膜 |
| 推荐货号 | 66485 | BSP0161 |
| 描述 | 纯硝酸纤维素，0.22μm | 聚偏氟乙烯，0.2μm |
| 应用 | 蛋白转移 核酸检测 ELISA | 蛋白转移 蛋白点或条印迹 免疫染色检测 |
| 优势 | 高灵敏度 低背景 | zui高的灵敏度 低背景 低 burn through 高结合力 化学品抗性 高拉伸强度 |
| 结合反应 | 疏水和静电 | 疏水（甲醇浸泡） |
| 固定方法 | Western 转移点或条印迹 烤和紫外交联（用于核酸） | Western 转移点或条印迹 |
转印膜的免疫印迹常见问题分析与解决方案
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
| 没有阳性条带或很弱 | 抗体活性低或效价低 | 分装和在零下 20 度储存抗体溶液以及避免多次反复冻融。使用更高浓度的一抗。 |
| 转膜不充分（转膜后通过凝胶染色得到了确认） | 增加转膜的时间。降低转膜缓冲液中甲醇的浓度。 加入 0.1%的 SDS 能够帮助大蛋白的转膜。 | |
| 低的偶联活性 | 确保胶和膜之间没有气泡。使用不含 SDS 的转膜缓冲液。如果使用的是 Biotrace NT 膜，则需在转膜缓冲液中加入甲醇 | |
| 封闭剂干扰了抗体的结合 | 在 4 度储存偶联物。增加偶联物的浓度或孵育时间。 | |
| 背景高 | 使用一个不同的封闭剂。 | |
| 抗体和酶偶联的效果差 | 颜色反应时间太长 | 当需要的颜色深度达到之后立即停止反应 |
| 封闭不* | 使用亲和纯化的二抗。 | |
| 封闭剂中存在磷酸酶或过氧化物酶的活性 | 增加封闭时间。使用一个不同的封闭剂。 | |
| 背景点状物 | 缓冲液中存在颗粒 | 试剂使用前用过滤器过滤。 |
| 假阳性或点状 | 一抗的交叉反应 | 进一步纯化或预吸附膜抗体。如果条件可以的话使用单抗。降低一抗的浓度。 |
| 样本中存在磷酸酶或过氧化物酶的活性（通过在检测中不加一抗和二抗得到确认） | 在封闭前通过 80 度 20 分钟加热来失活酶的活性。 |
WB产品线信息
| 货号 | 名称 | 规格 |
| SA7937 | RIPA裂解液(强) | 100ml |
| 37623 | Qproteome FFPE Tissue Kit从福尔马林固定、石蜡包埋组织中高效抽提全长蛋白 | 1kit |
| PA001 | BCA蛋白定量试剂盒 | 250次/500次/1000次 |
| PA002 | Bradford蛋白定量试剂盒 | 250次/1000次 |
| PA003 | Lowry蛋白定量试剂盒 | 250次/1000次 |
| 180-8210D | LDS Sample Buffer,With Reducing(4×) | 10ml/瓶 |
| 180-6003 | 预染蛋白Marker | 200ul/支 |
| 180-8001H | SDS梯度预制胶 4-20% 8X10cm 12 well | 10片/盒 |
| 180-8002 | SDS预制胶电泳缓冲液 Running Buffer（20X） | 500ml/瓶 |
| 180-1000/1/2 | VE-180 垂直电泳槽(0.75mm/1.0mm/1.5mm) | 套 |
| 180-**** | VE180垂直电泳槽其他配件 | EA |
| 180-7001 | 快速蛋白染液 Fast Protein Stain | 1L |
| BSP0161 | PVDF膜[0.2μm PVDF膜] (PALL) | 26cmx3.3m |
| 66485 | 硝酸纤维素膜[0.22μm] (PALL) | 30cmx3m |
| 8006-6006 | 快速转膜缓冲液（10 X） Fast Transfer Buffer Stock Solution | 500mL |
| 186-1000 | VE-186 转移电泳槽（标配） | 套 |
| 586-1000 | VE-586 转移电泳槽（四块胶，模具成型，含蓝冰冰盒）（标配） | 套 |
| 386-1000 | VE-386 半干转移电泳槽（标配） | 台 |
| SA7592 | 丽春红S染色液(10×Ponceau S) | 50ml/10ml |
| SA7588 | Western封闭液 | 100ml |
| SA7589 | Western封闭液(奶粉) | 100ml |
| SA7586 | Western blot一抗稀释液 | l |
| SA7587 | Western blot二抗稀释液r | l |
| 21338 | β-actin Antibody | 100ul |
| 21800 | β-Actin Mouse Monoclonal Antibody | 100ul |
| 21612 | GAPDH Antibody | 100ul |
| 44032 | β-Tubulin Monoclonal Antibody(5G3) | 100ul |
| L3032 | Goat anti-Mouse IgG Secondary antibody, HRP conjugated | 1ml |
| L3012 | Goat anti-Rabbit IgG Secondary antibody ,HRP conjugated | 1ml |
| L3042 | Rabbit anti-Goat IgG Secondary antibody,HRP conjugated | 1ml |
| 180-501 | 超灵敏 ECL发光液 | 50ml+50ml |
| 180-5001 | 超灵敏 ECL发光液 | 250ml+250ml |
| 010-Q | 1-200µl电泳点样吸头，无色透明，袋装 | 1000/袋，10袋/箱 |
| YW-ST-LW | 一次性乳胶手套，加厚型，L/M/S/XS | 100只/盒，10盒/箱 |
| YW-ST-TNB | 一次性丁腈手套，耐用型，L/M/S/XS | 100只/盒，10盒/箱 |
| YW-ST-GNB | 一次性丁腈手套，透气型，L/M/S/XS | 100只/盒，10盒/箱 |