色谱条件：

流动相：

1、色谱柱：SyiHend Amino Acid 4.6*250mm 5µm

流动相A： 0.1mol/L醋酸钠溶液（pH 6.5）：乙睛＝93.0：7.0

配制方法：准确称取无水醋酸钠8.203g于1000mL水中，搅拌均匀，使之溶解，用冰醋酸或氢氧化钠溶液调pH值至6.50；准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液930mL和乙腈70mL，混合均匀，抽滤过0.22µm滤膜；  

流动相B：水：乙腈＝20.0：80.0

配制方法：准确量取水200mL和乙腈800mL，混合均匀，抽滤过0.22µm滤膜；

梯度方法：

2. 梯度程序：

流动相A： 0.1mol/L醋酸钠溶液（pH 6.50）：乙睛＝93：7

流动相B： 水：乙腈＝20：80

T(min)                    A%                     B%

0.0                       100.0                      0.0

11                        93.0                       7.0

13.9                      88.0                    12.0

14                        85.0                    15.0

29                        66.0                    34.0

30                         0.0                       100.0

35                         0.0                       100.0

35.1                       100.0                       0.0   

45                         100.0                       0.0

流　速：1.0mL/min

柱　温：43℃

 波  长：254nm

 进样量：5μL 

3、样品制备衍生过程。

精密量取对照溶液5ml，加入25ml量瓶中，加入0.1mol/L异硫氰酸苯酯的乙腈溶液2.5ml，1.0mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml，摇匀，室温放置1小时后，加入50%乙腈水至刻度，摇匀，取10ml，加正己烷10ml，振摇，放置10分钟。取下层溶液，过滤，取续滤液，即得。

4、色谱图：

图1、样品衍生后

 图2：取样品溶液1ml加50%乙腈水稀释1倍。（由于衍生试剂浓度过大造成样品测定过载，形成峰分叉，样品稀释1倍后测定）

圣一恒德可根据不同样品分析，提供色谱柱试用。

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