1、检查和开启电源开关。

　　2、每次灭菌前都应检查贮水和开启进水阀加水，达到水位后关闭进水阀。

　　3、有序摆放灭菌物品，相互之间应保持有间隙地放入灭菌室内，有利于蒸汽的穿透，确保灭菌效果。敷料消毒摆放时不宜紧靠灭菌室门，以免蒸汽的冷凝水沿着门壁滴在敷料上，以致敷料吸收过多水份潮湿造成灭菌结束时不易干燥。

　　4、将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。

　　5、放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。

　　6、加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。

　　7、用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气*排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用1．05kg/cm2，121．3℃，20分钟灭菌。

　　8、灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。

　　9、将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。

　　10、消毒灭菌时间到后，按照各种不同消毒物品的要求，任由灭菌室内的蒸汽自然冷却或予以慢排或快排。消毒后使之干燥，可将总阀。当灭菌室压力表下降至“0”位后，再候1-2分钟，方可缓慢地转动转盘和拨动紧锁手柄，将门开启4-5厘米，再候10-15分钟，然后将消毒物品取出，即能干燥。

　　11、如不连续消毒灭菌，就将电源或蒸汽开关关闭，随后将总阀拨至全排，排去套层内的蒸汽并将大门开启少许，散发灭菌室内的剩余蒸汽，使灭菌室内壁经常保持干燥。

　　高压灭菌器的注意事项：

　　1.灭菌物不可放的过于密集。

　　2.不要让灭菌物品堵塞住灭菌器箱室内的孔和温度传感器，也不要让传感器受力。

　　3.灭菌锅使用前需将锅内冷空气排尽，以免因温度达不到影响灭菌效果。

　　4.灭菌器开启后不能强行打开灭菌器盖子，以免发生意外。

　　5.灭菌器内压力要基本恢复到大气压方可开启灭菌器盖子。

　　6.灭菌结束时，不能放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾冲掉瓶盖，严重时会导致容器爆裂。

　　7.灭菌器运行完毕2小时以上，让盖子打开状态下排放加热用水。