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胎牛血清的内毒素含量多少为宜?

时间:2023-08-16      阅读:221

   胎牛血清是在母牛怀孕3-8个月时,通过胎牛心脏穿刺采血获得新鲜的胎牛全血,经自然层析、离心后收集得到去除血细胞、纤维蛋白等成分的淡黄色透明上清液体,并在生产过程使用多级高置流膜过滤技术和三级0.1um终端微滤方法处理而的血清。相比于新生牛和小牛血清,胎牛血清中所含的抗体、补体等对细胞有伤害的成分最少,因此对于一些较“脆弱”的细胞如干细胞、原代细胞,—定要使用优质的胎牛血清进行培养。胎牛血清的内毒素含量多少为宜?
  有下列情况者,对血清内毒素应格外留意筛选:
  1.养干细胞时,干细胞对内毒素非常敏感,如果血清中内毒素≥3EU/ml时,干细胞很容易死亡。很多使用者,在血清在试用前,就通过提早审核该批次《检测报告》,以决定是否入围进行试用。
  2.养免疫细胞时,过高的内毒素可诱导免疫细胞释放炎症因子,抑制小鼠红细胞集落的形成等。
  3.基因敲除相关的细胞实验,培养的细胞要尽可能保持其原始状态,任何引导细胞衰老或凋亡的试剂,都会让后续的实验结果“失之毫厘,谬以千里”。在准备血清和其他试剂时,选择极低的内毒素(最好≤1EU/ml),对实验至关重要;
  4.原代培养、杂交瘤融合、细胞转染,或者肝细胞、神经细胞、内皮等难养细胞的扩增,这些都需要挑选好的血清给细胞以有力支持。因此,挑选更低的内毒素,是保证实验顺利的第一步。
  5.实验室有些细胞,需要长期培养、长期冻存,或者经常复苏、经常培养的,血清会经常或长时间作用于细胞。为保证细胞的健康,都应该选用更低内毒素的血清,以避免内毒素长久对细胞的毒性影响。
  总之,血清中内毒素含量过高,更容易导致细胞“亚健康”,造成数据不准,或细胞状态不良、老化、甚至死亡,导致试验中断失败。血清中的内毒素越低越好。
  全球细胞培养学会均依据内毒素对血清的品质进行分级和命名。
  内毒素含量越低的血清,级别就越高,以胎牛血清为例:
  当血清中内毒素含量≤10EU/ml时,此血清为特级胎牛血清;
  当血清中内毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml时,此血清为优级胎牛血清;
  当血清中内毒素含量≥ 25EU/ml时,此血清为标准级胎牛血清;
 
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