土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性检测试剂盒说明书

注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：DM-W-B900

规格：100T/96S

产品内容：

试剂一：液体 42mL×1 瓶，4℃避光保存。

微量法

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。用前加 100mL 蒸馏水充分溶解。试剂三：液体 2.5mL×1 瓶，4℃ 保存。

试剂四：粉剂×1 支，4℃避光保存。临用前加 576μL 无水乙醇（自备），24 μL 蒸馏水充分溶解。

（变褐色后不能再使用）

标准品：液体 1mL×1 支，0.5 μmol/mL 苯酚标准液，4℃保存。

产品说明：

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 显著影响，根据最适 pH 范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

酸性环境中，S-ACP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出 S-ACP 活性。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

称取风干混匀土壤约 0.1g，加入 0.05mL 甲苯（自备），轻摇 15min；加 0.4 mL 试剂一并且摇匀后，置于 37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应 24h；到时后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。10000rpm 室温离心 10min，取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤：

a. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。

b. 空白管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 10 μL 蒸馏水，20 μL 试剂三，4 μL 试剂四，充分混匀， 显色后再加蒸馏水 166μL，混匀后室温静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。

c. 标准管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 10 μL 标准液，20 μL 试剂三，4 μL 试剂四，充分混匀， 显色后再加蒸馏水 166μL，混匀后室温静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。

d. 测定管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 10 μL 上清液，20 μL 试剂三，4 μL 试剂四，充分混匀， 显色后再加蒸馏水 166μL，混匀后室温静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。

活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为 1 个酶活单位。

S-ACP（nmol/d/g）=[C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷W÷T

=725×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W

C 标准液：0.5 μ mol/mL； V 总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，24 h=1 d。