C666-1鼻咽癌细胞收到后处理

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的培养液收集至离心管中，加入6ml培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的培养基，另外一瓶用自己配的培养基）

C666-1鼻咽癌细胞培养步骤

一、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a）、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

b）、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。

三、细胞冻存：（注：无血清冻存液冻存细胞的方法请参考我司货号：C7001）

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；

4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃

C666-1鼻咽癌细胞部分相关细胞如下：

人胆囊上皮细胞永生化

人胰腺癌相关成纤维细胞永生化

人胰腺癌细胞永生化

人胆囊上皮细胞永生化+GFP

C57小鼠巨噬细胞永生化

人乳腺腺癌细胞+luc

猪扁桃体上皮细胞永生化

人风湿性关节滑膜成纤维细胞永生化

人肠癌细胞永生化

猪脂肪干细胞永生化

鸭胚肝间质细胞永生化

羊睾丸间质细胞永生化

兔肝间质细胞永生化

人颈静脉球瘤细胞永生化

人主动脉内皮细胞永生化

山羊乳腺上皮细胞永生化

猪骨骼肌卫星细胞永生化

人乳腺上皮细胞+RFP

人肝窦内皮细胞永生化

人副神经节瘤细胞永生化

人脑星形胶质母细胞瘤+RFP

人脐静脉内皮细胞永生化+GFP

人肠息肉上皮细胞永生化

人胆囊癌细胞+luc

人胆囊癌细胞+luc

人胰腺癌细胞吉西他滨耐药株

人原代听神经瘤细胞永生化

人原代髓核细胞永生化

人原代神经鞘膜瘤细胞永生化

人胰腺肿瘤成纤维细胞永生化

人子宫内膜上皮细胞永生化

大鼠脑微血管内皮细胞永生化

小鼠肺成纤维细胞永生化

小鼠肝癌细胞+luc

小鼠骨肉瘤成骨细胞+luc 

小鼠胰腺星状细胞永生化

鸭脑微血管内皮细胞永生化

湖羊瘤胃上皮细胞永生化

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