传 代

1一般在复苏后第7~10天传代，之后常规传代为6-7天一次。

2吸除废液。用DPBS（不含钙镁离子）轻轻冲洗一遍。

3加入2~3ml的1mg/ml的干细胞专用消化液至培养瓶，轻轻晃动，使之覆盖底面，置于37℃培养箱内消化细胞。

4在显微镜下观察，直至克隆脱落（一般需要3~6min）。

 5将带有脱落克隆的消化液转移至15ml离心管中，放置一会，待克隆自然沉降后将上层吸除，加入H9培养液3ml轻轻混匀，

放置一会，待克隆自然沉降后将上层培养液吸除，重复一次（即H9培养液漂洗2遍，沉降后吸掉上清）。

6加入H9培养液3ml，用1ml移液器吹打2-3次，将克隆块吹散成大小为原来的约1/10（若想得到大小较均一的克隆块，

此时可将细胞静置片刻，待细胞自然沉降后取悬浮于液体中间层的克隆块传代），传代比例根据母瓶克隆密度和大小而定，一般1:3~1:5传代。

7放入37℃培养箱内培养。

8第二天不换液，第三天起每天换液，换液前显微镜下将分化的克隆挑除。

 注意：传代时不能吹打过度，不能吹打成单细胞，保持细胞克隆块状，传代后48小时换液，期间最好不要挪动细胞。每6~7天传代一次。