细胞老化的形态和分子生物学变化

1、显微镜下观察，老化的细胞通常会在细胞内部出现空泡（可能是凋亡小体）。但是，需要区分的是，部分细胞本身会有少量空泡，对于这些细胞，要每天观察，注意细胞空泡是否增多。

2、显微镜下，也可能会观察到更多的黑点，大多沿细胞周边排布，细胞内部也可能会出现一些，但相对周边为少。

3、老化以后的细胞会出现立体感慢慢消失，开始成扁平状，这是因为细胞的折光性变差，显微镜下可以直观地观察到细胞“变薄”。

4、细胞与细胞之间的间隔减小或混在一起，细胞不再是梭形，而会成为各种不规则形状。

5、如果是贴壁细胞，会发现细胞的贴壁性减弱，开始有细胞漂浮于培养液中。

6、老化的细胞，表面分泌物会增多，细胞表面的纯净度越来越低，不再保持透亮。

7、细胞的增殖速度显著降低，细胞活力变弱。

8、有些细胞在正常培养的条件下，也会开始长角，即发生了细胞分化。

9、由于细胞周期中断和DNA复制停止，老化细胞内的DNA含量与正常细胞类似，但细胞内的RNA与蛋白质丰度均比正常细胞要明显升高。这是由于，

虽然细胞进入老化阶段后蛋白质的整体合成速率降低，但是蛋白质的降解体系受到更加明显的抑制，导致蛋白质在细胞内持续堆积。

最后，需要强调的是：由于不同组织来源的细胞，其形态本就各不相同，因此目前还没有一个客观的、统一的标准从细胞形态判断并定义老化细胞。

因此，在细胞培养的过程中，持续观察细胞，关注细胞的变化，是一位细胞培养员的重要工作内容。

 什么是细胞老化？

1.防止细胞老化最主要还是要做到勤观察、勤换液、勤传代、勤保种，特别是传代，不能等细胞太密了之后传，一般细胞建议长到80％~90%融合度传代最好；

2.换培养液频率与培养的细胞种类直接相关，建议新手培养员在培养每一种细胞时，多多咨询有经验的同学、技术员等，同时在实际操作的过程中积累经验，形成自己的最佳培养体系；

3.选择可靠且稳定的血清和培养基至关重要：血清和培养基直接为细胞提供生长所需的营养，它们直接关系到细胞的生长状况。务必挑选适宜的血清，否则由于营养成分不均衡，可能导致细胞提前老化。

此外，一个稳定的培养基同样是培养细胞的关键因素。

4.在培养大部分贴壁细胞时，消化步骤不可避免，但是消化对细胞的表面蛋白质有一定的破坏作用，因此不能长时间进行消化并且在选择消化酶时也要选择较为合适的pH和浓度，不然就会使细胞老化或者分化；

5.在着手培养细胞并进行传代的同时，及时进行细胞的冻存工作至关重要，以确保细胞种子库的持续存在，这能有效预防细胞事故导致实验室中某一株细胞绝种。尽管老化细胞不会即刻消亡，但它们的基因表达模式会经历变化，

可能会对生物实验的结果产生较大影响。如果发现正在培养的细胞老化严重，建议从种子库或工作库中重新复苏细胞。