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Qubit检测中遇到的问题查缺补漏

时间:2024-10-24      阅读:328

您在Qubit检测中遇到了除“标准品错误”以外的其它试剂盒相关问题。

这里有一些建议,不知对您是否有帮助,一起看看吧
1.在“查看标准品”或"查看校准"下查看标准品的原始荧光值(RFU)。确认样本的荧光值落在标准品的荧光值之间(或稍稍高于最高的标准品)。如果不是,那么样本已经超过了检测的精确范围。请参看产品目录中的各个检测试剂盒的置信区间。如果检测样本超过了置信区间,那么检测读数将是2位有效数字而不是3位。 要使样本进入准确测定范围,可稀释样本或使用更多或更少体积的样本(例如,如果样本读值较低的话,使用10 µL而非2 µL)。
2.检查温度因素。检测是温度敏感性的,荧光信号在较高温度时会减弱。样本之间或样本和标准品之间的温度波动可能引发问题。
确保缓冲液和保存在DMSO内的Qubit试剂处于室温。缓冲液和Qubit试剂应保存于室温,而不是冰箱内。保存于 4°C的缓冲液即使在室温放置2–3小时仍然不能达到室温。
确保你的样本和工作溶液不能过热(包括刚从离心机取出时)。保留在Qubit仪器内过久或多次读取的样本可能会升温。如果你想对一个试管多次读数,你应该将它从仪器内取出,放置30秒以平衡至室温,然后进行下一次读数。另外,在读数之前,不要将试管握在手中过长时间,因为这会加热样本,使读数变低。
3.确保正确制备Qubit工作溶液(使用试剂盒内的缓冲液1:200稀释)。确保正确制备标准品(10 µL标准品加入到190 µL工作溶液中)。确保试管中加入至少200µL液体(对于标准品和样本均是如此)。
4.确保你使用的试剂和标准品是6个月之内的,并且标准品保存方法正确。Qubit试剂存储溶液应尽可能避光保存。
5.确保在Qubit荧光计上选择的程序跟你所用的Qubit检测试剂盒是匹配的。
6.读取标准品和样本数值时,确保仪器的盖子关闭。
7.使用推荐的检测管(检测管不能阻挡仪器盖上盖子,并且检测管应当光学透明)。某些类型的检测管可能有较高的自发荧光而影响检测。
8.你在Qubit仪器中输入你所加入到工作溶液中的存储液的微升数了吗?如果输入了,那么Qubit荧光计获得此信息后给出的浓度是你的存储液的浓度。如果没有输入,那么你得到的浓度是检测试管(你放入Qubit荧光计的试管)内的浓度——不是你的存储液浓度。
9.如果你是将Qubit检测的结果和使用UV吸光值获得的浓度进行比较,并且基于UV吸光值的浓度显著较高,那么可能是因为核酸或蛋白污染。Qubit检测试剂对于DNA, RNA和蛋白的检测特异性比吸光值测定法高得多。

 


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