Dynabeads 蛋白 A 为表面共价偶联有重组蛋白 A （∼45 kDa）的 2.8 µm 均匀超顺磁性微珠。Dynabeads 蛋白 A 为免疫沉淀（IP）提供了可替代 Sepharose 树脂或琼脂糖树脂的出色替代产品，手动和自动方案均可用。

•在不到40分钟内完成 IP
• 高靶蛋白得率和低抗体消耗
• 极低非特异性结合及高信噪比
• 无需色谱柱、离心步骤或耗时的预清洗步骤
•高重现性和高通量与 KingFisher 仪器兼容

小贴士：如何减少免疫沉淀中的背景

Dynabeads磁珠可以被磁化，与磁力架一起使用时，可轻松将其拉到样品管的一侧。这一特点使得移除缓冲液或上清液变得非常容易，不会造成任何破坏或样品损失。

Dynabeads磁珠的一个关键特点是其表面清晰，没有孔隙。所有的结合都发生在外表面，从而防止任何不需要的蛋白质被困在内部。

为了进一步减少免疫沉淀中的背景，建议洗涤含有感兴趣蛋白质的磁珠，以去除任何不需要的蛋白质或蛋白质片段。

图1. 用于免疫沉淀的 Dynabeads Protein A 磁珠与其他供应商的对比。进行Western blot来比较使用1）Sepharose离心柱、2）Sepharose混悬液、3）琼脂糖混悬液和离心柱、4）树脂离心柱、5）Dynabeads Protein A磁珠的方案时间和背景的差异（每种方法一式两份）。Dynabeads Protein A磁珠的免疫沉淀具有低背景且至少节省14分钟的时间。

可快速且简便的进行手动 Dynabeads 分离
手动方案简单且可在40分钟内完成。首先，将靶蛋白的抗体与 Dynabeads 蛋白 A 在试管中孵育 10 分钟。通过将试管置于 DynaMag 磁力架中并去除上清液，洗去过量抗体。然后，抗体包被磁珠可用于多种下游应用，包括 IP、Co-IP、染色质 IP (ChIP)、RNA IP (RIP)、小规模 IgG 纯化和蛋白纯化。由于 Dynabeads 的磁性，使用 DynaMag 磁力架可轻松收集结合材料。微珠上的重组蛋白 A 不含白蛋白结合位点，因此在程序中不会共纯化白蛋白。IP 速度快，并且具有高得率、高重现性且非特异性结合极少，因此无需预清洗步骤。

自动 Dynabeads 分离有助于提高通量并缩短手动操作时间
如果您并行处理多份样品，洗涤步骤数量和手动操作时间会与样品数量成比例地增加。一次处理多个样品时，移液管及其他手动操作获得的结果往往不如自动化。为了更好地处理中等至高通量的样品，减少手动操作时间并确保可重现性较高，我们开发了适用于 KingFisher Flex 和 KingFisher Duo Prime 仪器的 IP 方案。自动化方案复制人工方案，从而获得同样高的靶蛋白产率以及相同的低非特异性结合和高可重现性。无论您要处理 10 个还是 96 个样品，IP 方案可在 40 分钟内完成。’只需将试剂加载到孔板上，按下“开始”按钮，到您准备好下游分析时，IP 即可完成。根据抗体和靶蛋白的丰度和/或特异性，可能需要进行一些优化（例如，孵育时间）。

•KingFisher Duo 仪器适用于低至中通量（1-12 份样品/运行）
•KingFisher Flex 仪器适用于高通量（12-96 份样品/运行）

温和分离可尽可能减小对蛋白的物理应力
用于 Dynabeads 蛋白 A 的磁性分离技术快速且温和，可尽可能减小对靶蛋白的物理应力。这允许分离和浓缩不稳定的复合物，否则在长时间孵育期间可能会被蛋白酶解离或被其破坏。保存天然蛋白构象和大蛋白复合物。

结合强度和结合能力
Dynabeads 蛋白质 A 可以分离大多数哺乳动物的免疫球蛋白（Ig）。捕获的 Ig 量取决于起始样品中 Ig 的浓度以及 Ig 的类型和来源。100µL Dynabeads 蛋白 A 将从每毫升含有 20–200µg IgG 的样品中分离出约 25–30 µg 人 IgG。绝大部分位点与 Fc 结合，实现优化的 Ig 取向。抗体与微珠的光滑外表面结合，因而不会像与基于 Sepharose/琼脂糖的微珠结合时一样吸附在大孔中。所有抗体都可用于蛋白结合，因此，仅需加入少量抗体，靶蛋白得率依旧很高。光滑磁珠表面也实现了 Dynabeads 出色的低非特异性结合能力。