色谱柱是液相色谱的心脏，在液相色谱仪的使用中，保持色谱柱的柱效、容量和渗透粉性，延长柱子的使用寿命非常重要。因此对液相色谱柱的维护是关键。

1 色谱柱的构造 
      色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成，压力不高于70㎏/㎝2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钦合金，孔径0.2-20 μm(5-10μm)，取决于填料粒度，目的是防止填料漏出。

色谱柱按用途可分为分析型和制备型两类，尺寸规格也不同:

(I)常规分析柱(常量柱)，内径2-5mm(常用4.6mm，国内有4mm和5mm )，柱长10-30cm ;

(2)窄径柱，又称细管径柱、半微柱，内径1 -2mm ,柱长10-20cm;

(3)毛细管柱(又称微柱)，内径0.2-0.5mm;

(4)半制备柱，内径>5mm;

(5) 实验室 制备柱，内径20-40rnm，柱长10-30cm;

(6)生产制备柱内径可达几十厘米。柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定，目的是为了避免管壁效应。

2色谱柱的使用和维护

在日常分离分析工作中，色谱柱的正确使用和维护十分重要，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。

(1)柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。

(2)如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根柱，这样有助于延长柱子的寿命。

(3)避免压力和 温度 的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。

(4)应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。

(5)如使用柱温控制装置时，应注意在通人流动相后才能升温。

(6)一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。

(7)选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。

8)避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。

(9)经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50-75mL。

(10)保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。

(11)色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进人柱内，使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。

(12)在完成分离分析工作之后，不应立即停机，需及时对色谱分析系统进行冲洗，一般0.5h以上，以除去色谱柱内的杂质。

3色谱柱的再生

因为液相色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，当出现色谱峰高阵低，峰宽加大或出现肩峰时，一般来说可能是柱效下降。

(1 )反相柱的再，采用以甲醇:水=95: 5(V/V),纯甲醇，二氯甲烷等溶剂作流动相，顺次冲洗，每种流动相流经色谱柱的量为2030倍色谱柱体积然后再以相反顺序冲洗色谱柱。

(2)正相柱再生。顺次以正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作流动相冲洗色谱柱每步注意平衡溶剂的顺序，不要颠倒每种流动相流经色谱柱的量为20-30倍柱体积(因异丙醇的粘度较大，冲洗过程中请随时注意调整冲洗的流速)，用甲醇冲洗完后，再以相反的顺序冲洗色谱柱。要注意上述溶剂必需严格脱水。

(3)离子交换柱的再生。长时间在高pH值和高离子强度缓冲溶液中使用，将导致色谱柱离子交换能力降低。用稀酸缓冲溶液冲洗，可使阳离子柱再生;反之，用稀碱缓冲溶液冲洗，可使阴离子柱再生。以上色谱柱的再生方法并不是的标准方法，使用者可根据自己的实际经验和目的，选择合适的并能溶解柱内污染物的溶剂作流动相，按正方向或反方向的冲洗。

但是需要指出是，无论采用什么方法再生色谱柱，均不可能*对复柱效或其他参数至新柱水平。

4色谱柱的发展方向

因强调分析速度而发展出短柱，柱长3-10cm，填料粒径2-3 μm。为提高分析灵敏度，与质谱(MS)联接，而发展出窄径柱、毛细管柱和内径小于0.2mm的微径柱。细管径柱的优点是:节省流动相、灵敏度增加、样品量少、能使用长柱达到高分离度、容易控制柱温、易于实现LC-MS联用。

但由于柱体积越来越小，柱外效应的影响就更加显著，需要更小池体积的检测器(甚至采用柱上检测)，更小死体积的柱接头和连接部件。配套使用的设备应具备如下性能:输液泵能情密输出1-100μL/min的低流量，进样阀能准确、重复地进样微小体积的样品。且因上样量小，要求高灵敏度的检测器，电化学检测器和质谱仪在这方面具有突出优点。