广普公司提供三聚氰胺分析方法包组件清单
时间：2011-08-22 阅读：2422
三聚氰胺分析方法包组件清单包括：
1. Venusil ASB-C18或ASB-C8色谱柱或XBP-C8色谱柱（4.6*250mm,5μm,150Å）任选1支
2. 混合型的阳离子交换柱（Cleanert PCX 60mg/3mL）50支/盒，3盒
以上2项均为*“十一五”国家支撑计划成果
3. 三聚氰胺标准品1瓶（250mg，≥99.5%）
4. 真空固相萃取装置（12位）
5. 0.22μm，13mm Nylon针式过滤器过滤 200个/包
6. 三聚氰胺分析方法手册1份
7. 庚烷磺酸钠（10g/瓶），高纯甲醇、乙睛
* 试剂规格请以签订合同时为准，博纳艾杰尔科技拥有zui终解释权。
1 固相萃取（SPE）柱的选择：
三聚氰胺呈弱碱性（弱阳离子化合物），净化过程一般选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱（PCX）通过将磺酸基团（-SO3H）键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附剂上，具有阳离子和反相两种吸附机理，并具有以下优点：
1） 可通过两种不同溶液的洗涤（水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂），使样品更干净，提高检测的灵敏度。
2） 批次重复性好。
3） 回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。
2 样品前处理步骤：
2.1标准样品配制：
取50mg三聚氰胺标准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液，使用时，以合适溶液稀释至所要的浓度。
2.2提取：
称取饲料/奶粉样品5g （或牛奶10mL），加入50mL 1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入2mL 2%乙酸铅溶液，超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱（PCX），同时处理多个样品，需要用真空固相萃取装置（12位），可达到方便、快速、高通量分析样品的目的。
2.3净化（PCX小柱，60mg/3mL） ：
1） 活化及平衡：3mL甲醇，3mL水
2） 上样：加入提取液3mL
3） 淋洗：3mL水；3mL 甲醇；弃去淋洗液并将小柱抽干。
4） 洗脱：5mL 5%氨化甲醇（v/v）洗脱。（5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇）。
5） 浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至1mL。
2.4检测：
HPLC-UV检测方法
三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离，按照美国食品*（FDA）的三聚氰胺检测方法和中国*颁部的三聚氰胺检测方法，采用艾杰尔（Agela） Venusil ASB系列和Venusil XBP色谱柱，均能得到良好的结果，分析色谱图如下：
1、 三聚氰胺的FDA检测方法
色谱柱：Venusil ASB C8 4.6×250mm
缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0。
流动相：缓冲液：乙腈= 85：15
进样量：样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL，进10μL，
进样前用0.22μm针式过滤器过滤
流 速：1.0mL / min
柱 温：40 ℃
波 长：240nm
2、三聚氰胺的中国*颁标准检测方法
（1）色谱柱：Venusil ASB-C18 4.6×250mm
缓冲液：10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠
流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15
进样量：样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL，进10uL
进样前用 0.22μm针式过滤器过滤
流 速：1.0mL/min
柱 温：40℃
波 长：240nm
（2）色谱柱：Venusil XBP-C8 4.6×250mm
缓冲液：10mM柠檬酸，10mM庚烷磺酸钠
流动相：缓冲液：乙腈=85：15
进样量：样品用缓冲溶液溶解成约0.1mg/ml，进10μL
进样前用0.22μm针式过滤器过滤
流速：1.0mL/min
柱温：20℃
波长：240nm
Rt＜10min
LC-MS参考方法
由于HPLC-UV方法中，流动相添加了离子对试剂，限制了液质联用方法的使用；但不用离子对试剂色谱方法，三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差，没有良好的保留与分离。
源于此问题，博纳艾杰尔科技公司自主开发了新的方法，采用博纳艾杰尔（Agela） Venusil ASB系列亲水色谱柱，不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离，参考方法如下：
缓冲液：10mM NH4AC
流动相：缓冲液：ACN=95：5
流 速：1.0mL/min
进样量：先用70%ACN溶解成约1mg/mL，用ACN稀释成0.1mg/mL，进10μL
进样前用0.22μm针式过滤器过滤
柱温：40℃
波长：240nm
用LC-MS/MS检测方法分析，测得PCX柱的回收率结果如下：
| 添加水平（mg/L） | 回收率 |
| 空白 | |
| 0.01 | 116% |
| 0.1 | 108% |
| 0.5 | 92% |
| 2 | 96% |