美国兰博LBA800氨基酸分析仪检测牛乳中非法添加的大豆蛋白

    随着鲜牛乳的消费量迅速增加，在纯牛乳中非法添加大豆蛋白以提高蛋白质含量从而获得较高的经济效益，不仅降低了牛乳的营养价值，也严重损害了广大消费者的利益。因此，检测原料乳中掺入大豆蛋白对原料乳的质量控制有重要意义。

    目前的乳品蛋白质掺假检测方法涉及了色谱、质谱、免疫、聚合酶链式反应、电泳、光谱学、分析化学等技术领域。

    利用传统的化学检测方法检测牛乳中的大豆蛋白，简单快速但只能定性不利于蛋白的定量检测。

    通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳中牛乳和大豆蛋白的条带对比可检测掺假量体积分数5%的豆浆，凝胶电泳耗时较长且检出限较低。

    利用近红外光谱法、液相色谱法以及聚合酶链式反应等结合化学测定方法或质谱法可以定性定量检测牛乳中的大豆蛋白，但是检测成本较高。

    美国兰博天津应用研发中心使用氨基酸分析仪，利用牛乳和大豆蛋白质的氨基酸组成含量差异对牛乳中掺入的大豆蛋白进行定性定量检测，弥补了现有方法耗时长检测不灵敏的不足。

仪器与设备

LBA800型氨基酸分析仪及数据处理平台—美国兰博公司；

KQ-250B型超声波清洗器

凯氏定氮装置

高速冷冻离心机

均质仪等

样品处理

取2.5 mL液体样品（0.100 g固体样品）于水解管中加10 mL 6 mol/L盐酸滴入正辛醇充氮后封管置于110 ℃烘箱中保持24 h，冷却后经滤纸过滤到50 mL容量瓶中用超纯水反复冲洗水解管及滤纸zui后定容。取 1 mL的样液于蒸发皿中在蒸气浴上蒸干，然后加0.02 mol/L盐酸2.5 mL溶解用针管过滤器过滤，备用上机。

色谱条件

荧光激发波长338 nm；荧光发射波长425 nm；柱温62 ℃；反应器35 ℃；进样量10 μL；流速0.4 mL/min；柱后泵流速0.4 mL/min；流动相配制见表1，梯度洗脱程序见表2。

结果与分析

氨基酸标样的回归方程、相关系数和线性范围

检测牛乳中掺入大豆蛋白的方法的建立

掺假牛乳中6 种氨基酸含量与大豆蛋白添加量的关系

假设随着大豆分离蛋白在牛乳中添加量的增加，天冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、精氨酸在牛乳中的含量也随之增加。6 种氨基酸含量与大豆蛋白添加量都存在着一定的线性关系。

 利用氨基酸分析仪对牛乳、大豆、掺假样品中17 种氨基酸进行分析，方法简单，准确度、重复性和稳定性较好。

取自同牧场同品种乳牛的常乳样品氨基酸图谱相似，氨基酸组成和比例基本一致；不同厂家的大豆分离蛋白的氨基酸图谱及含量差别不大，说明实验具有一定的区域代表性。不同的牛乳样品通过模拟掺假实验，以掺假样品中的6 种氨基酸（天冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、精氨酸）含量为横坐标以掺假的大豆分离蛋白占样品总蛋白的百分比为纵坐标得到线性方程y=0.061x＋6.586，R2=0.889重复性较好，即可通过样品中特定氨基酸含量和推算出掺入大豆蛋白的比例，从而建立了纯牛乳中大豆蛋白掺假的定量检测方法，且大豆蛋白掺假量在总蛋白含量的1%以上时，此法就可有效地进行检测，方法简单，灵敏度高。本研究为牛乳中大豆蛋白的掺假检测提供了创新方法，对更广阔区域内的牛乳和其他类蛋白质掺假还有待进一步的验证和探索。