液相色谱仪系统由贮液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。贮液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

 

　　与试样预处理技术相配合，所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。

 

　　液相色谱仪成为解决生化分析问题有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。

 

　　1、*，液体对于气体是有一定的溶解度的。液体的压力越高，对气体的溶解度越好。所以，当一瓶未开封静置的可乐，你是看不到气泡的，因为气泡都溶解在里面了。当你开启瓶盖，直接的影响就是瓶子里面的压力降低了，对气体的溶解度变小，所以气体就析出变成一个个的小气泡。

 

　　2、喝过啤酒或者碳酸饮料的人都有这样的经历，当你摇晃瓶子，然后瞬间把瓶盖开启，啤酒或碳酸饮料瓶中会喷出大量泡沫，摇晃的越剧烈，喷射的越猛，不难看出，溶解气体的液体在振荡和运动过程中，也容易让气泡析出。

 

　　3、上学的时候，化学课上，我们曾经怀疑过一个问题：把一升甲醇倒进一生纯水里面，液相色谱仪的体积是不是两升？当我们亲自试验后，就排除了这个疑问，而且我们可以明显看到，当两种液体混合的时候，会有大量的气泡冒出，体积也小于两升。

 

　　进口液相色谱仪按其分离机理，可分为四种类型。

 

　　吸附色谱法的固定相为吸附剂，色谱的分离过程是在吸附剂表面进行的，不进入固定相的内部。与气相色谱不同，流动相（即溶剂）分子也与吸附剂表面发生吸附作用。在吸附剂表面，样品分子与流动相分子进行吸附竞争，因此流动相的选择对分离效果有很大的影响，进口液相色谱仪一般可采用梯度淋洗法来提高色谱分离效率。

 

　　在聚合物的分析中，吸附色谱一般用来分离添加剂，如偶氮染料、抗氧化剂、表面活性剂等，也可用于石油烃类的组成分析。

 

　　分配色谱法

 

　　这种色谱的流动相和固定相都是液体，样品分子在两个液相之间很快达到平衡分配，利用各组分在两相中分配系数的差异进行分离，类似于萃取过程。

 

　　一般常用的固定液有β（ODPN）、聚乙二醇（PEG400～4000）、*撑乙二醇（TMG）和角鲨烷（SQ）。采用与气相色谱（GC）同样的方法，将固定液涂渍在多孔的载体表面，但在使用中固定液易流失。目前，应用较多的是键合固定相。在这种固体相中，固定液不是涂在载体表面，而是通过化学反应在纯硅胶颗粒表面键合上某种有机基团。

 

　　例如，利用氯代十八烷基硅烷与硅胶表面的羟基（-OH）之间的反应就可以形成一烷基化表面。这种固定液的优点是不易被流动相剥蚀。在分配色谱法中，流动相可为纯溶剂，也可以采用混合溶剂进行梯度淋洗，其极性应与固定液差别大一些，以避免两者之间相溶。

 

　　在我们做实验的时候用液相色谱仪分析过程的时候影响溶液迁移的因素比较多。同一样的组分在不同的色谱调件下保留的值也会不同，即使是在一样的测定条件下。同一组分在不同的色谱柱上面保留的数值差别也会不同。所以，液相色谱和气象色谱相对比，定性的难度大很多，液相色谱仪分析经常使用的定性方法有很多。比如，利用已知标准样品定性，利用检测器的选择性定性或者利用紫外检测器全波长扫描功能等来定性。

 

　　进口液相色谱仪的使用方法的具体步骤

 

　　1、色谱柱它包括空柱和填料。空柱是内壁抛光的不锈钢管，内径为4～5mm，长100～250mm。按气相色谱法中洗涤空柱的方法洗净，用匀浆法填充固定相。将此柱装入仪器的管路中，用柱式机械往复泵输入新鲜脱气的流动相。等基线平直后可用苯、萘、菲的混合试液，用正己烷或甲醇：水为流动相测定柱效及分离度塔板数在2～3万/ml以上及分离度在1.5以上者，柱效好。

 

　　为防止柱污染，常用1个 50mm长，4~5mm内径，装有硅胶或立柱相同填料的保护柱接在主柱之前，以延长色谱柱的寿命。反相键合相柱用毕。必须用水充分流经，以洗去盐类、酸碱等杂质防止柱生锈及填料中杂质的积聚，再用甲醇流经洗涤使色谱柱获得再生。

 

　　2、流动相的洗脱方式配好经脱气的流动相放于贮液瓶中，经过有滤过头、内径2mm的聚四氟乙烯管流入高压泵进入色谱柱，zui后自检测器流出或收集或作废液回收。用流动相洗脱的方式有恒溶剂脱洗法，即自洗脱开始到结束，溶剂的配比恒定。

 

　　另一类为梯度洗脱法，即使溶剂的极性强度在色谱过程中逐渐增加。须按一定程序不断改变流动相的浓度配比，从而使同一个试样中组分性质相差较小的及较大的都能在一次色谱过程中很好分离，而整个色谱过程缩短。必须注意，梯度洗脱法不能用于分子排阻色谱及用电化学检测的反相液相色谱法中。

 

　　3、检测器适用于血药浓度的检测器有紫外线吸收，荧光发射和电化学三种。紫外检测器应用于对紫外光有吸收的药物，大多数药物分子对紫外光有吸收，故能较普遍采用，检测限有0.1μg左右。液相色谱仪有固定波长型、可变波长型及扫描器，既能使流动相停流作组分的定性定量检测，又能提高测定灵敏度，重现性较好。荧光发射检测器对能产生荧光的药物才能使用。