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会导致C18液相色谱柱堵塞的原因及预防方法分享

时间:2022-12-02      阅读:448

   C18液相色谱柱在吸附样品时,样品中所含有的盐、脂质、疏水蛋白质和其它一些生物物质都有可能与其发生相互作用,一些保留值较小的物质如盐类比较容易被冲出,而一些保留性较强的组分,流动相溶液不足以把这些物质洗脱下来,多次上样后,这些吸附在柱子表面的物质通常就会积累在柱头。
 
  其柱粒径为2.7μm,由1.7μm直径的实心核和0.5μm厚的多孔外层构成。这种小粒径填料具有与亚2微米柱类似的高柱效,但柱反压低40-50%。这种高柱效、高分离度色谱柱可以用于任何类型的液相色谱。多孔层和实心核限制了扩散距离,提高了分离速度,而窄粒径分布提高了柱效和分离度。
 
  C18液相色谱柱出现颗粒物堵塞的原因:
 
  可能堵塞进口端筛板(前筛板)和柱头填料间隙的颗粒物来源有:样品(制样时灰尘和滤纸等带入)、进样阀密封圈磨损、流动相(溶剂本身含有和配制过程进入)、液相仪器中泵阀密封圈的磨损、缓冲盐析出(一般在梯度运行和进样时盐的溶剂环境改变导致)。水和缓冲盐流动相内生长的细菌,也是颗粒物来源的一种,可堵塞筛板和填料间隙。应避免将这类流动相在室温下久放,可放入冰箱存放。
 
  那么如何进行预防呢?
 
  样品(甚至标准品)和流动相过滤,既预防了筛板、柱头和毛细管堵塞,又能减少进样阀、活塞杆和截止阀等仪器关键部件的磨损。滤膜材质有再生纤维素、聚四氟乙烯、尼龙、硝酸纤维和醋酸纤维等,须根据和样品溶剂及分析物的适应性慎重选择。在线过滤器内装有可更换的滤片,滤片孔径一般有2um和0.5um两种。安装位置有两个可选择,在进样器和色谱柱之间时,对样品和流动相中的颗粒物都有效;在泵和进样器之间,则只对流动相有过滤作用。
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