背景介绍： 万古霉素(Vancomycin，VCM) 是支链的三环糖基化非核糖体 肽，可直接作用于细菌细胞壁前体羧基末端的D-丙氨酰-D-丙氨 酸，抑制细胞壁蛋白的合成，革兰阳性菌对万古霉素敏感，因 此对VCM对该类细菌有较强的杀菌作用，所以，它是目前治疗 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus，MRSA)和耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)等所致 重症感染的抗生素，在临床治疗学上占据重要地位。临床 上常常进行静脉给药全身应用万古霉素以治疗敏感菌感染，但 这种用药方式经常损害人体肝脏、肾脏等重要组织器官，造 成比较严重的副反应。传统上，万古霉素被用作“后一线药 物”，用来治疗所有抗生素均无效的革兰氏阳性菌的严重感 染。因此，为个体化给药方案提供理论依据，避免给危重病人 带来更加严重的副反应，实现万古霉素的准确定量的意义重 大。

由于每个个体之间年龄、性别、健康状况等都存在差异性，会 导致患者体内万古霉素的血药浓度的个体间偏差较大。而通过 治疗药物监测 (Therapeutic drug monitoring, TDM)可以帮助医生 制定个体化用药方案。给药时，剂量将依据患者的血液浓度作 调整，使患者在不良反应风险较小的条件下获得较好的疗效。 给药期间定时监测血药浓度有助于降低不良反应发生的风险。 当患者病情得到较好的控制而血药浓度过高，可以根据医嘱相 应地减低剂量，降低不良反应风险；若患者病情不能得到控 制，血药浓度的结果还可以帮助医生调整用药剂量，以获得更 好的疗效。

 方法介绍及优势 本文在新款智能Vanquish Core双三元液相系统上开发OnlineSPE自动化样品前处理的液相色谱分析方法，用于监测血 清中万古霉素含量。该方法具有灵敏度高、重现性好、耗时短 等特点。从万古霉素的线性范围、重复性测试，到血清的加标 测试，对血清中的万古霉素进行了完整的定量分析，系统地为 临床个性化、更合理、更安全地用药提供一定的依 据，提升临床的药物依从性，给患者提供更好的疗效。

 实验方法 1. 实验部分 1.1 仪器与试剂 1.1.1 Thermo Vanquish Core 高效液相色谱系统 Vanquish Core DGLC高效液相色谱系统包括带在线脱气单元的 双三元梯度泵、等度泵、自动进样器（1000 µL 进样环）、柱 温箱 (含一个Viper Only 2p-6p切换阀) 和DAD检测器（含13 µL流 通池；CDS变色龙色谱软件版本为7.2.10。 1.1.2 试剂及标准品 乙腈、甲醇 (色谱级，Fisher公司)，去离子水(18.2MΩ，Millipore 纯水机)，磷酸（分析纯AR，国药集团），盐酸万古霉素 ( 96.5%，DR. EHRENSTORFER) 1.1.3 样品溶液制备 标样的配制：用水溶解，配置万古霉素储备液100 mg/L，并用 50%甲醇水稀释至需要浓度的溶液。加标血清制备：用移液枪准确吸取1000 µL空白血清，分别加入 适量万古霉素稀释标准溶液，配置成需要浓度的加标血样。 血液样品的配制：准确吸取1.00 mL血清于10 mL离心管中，加 入3 mL沉淀试剂，涡旋混合20 s，12000 r/min下离心10 min， 取上层清液过0.22 µm水相膜加入进样小瓶，等待进样。

 1.2.2 色谱分析条件 色谱柱：Thermo Hypersil GOLDTM aQ色谱柱（150 mm * 4.6 mm，5 μm） 萃取柱：SPE TDM柱 (重庆大学药学院合作实验室提供) 柱温：30 ℃； DAD ：检测波长210 nm DGLC左泵（分析泵）流动相A：乙腈，流动相B： 1000 mL水 溶液(50 μL磷酸) 

 精密吸取1mL空白血清，分别加入适量万古霉素稀释标准溶，配置成不同浓度的标准溶液，标准品浓度分别为0.502、1.004、 2.008、5.020、10.04 和 20.08 μg/mL，进样体积为200 μL。图5所示为标准曲线，线性回归方程为 Y=0.8161X-0.1251 ，R2=0.9991，表 明在0.502 - 20.08 μg/mL 浓度范围内线性良好，同时该方法空白血清样品在万古霉素出峰位置（5.41 min）无基质干扰。由于万 古霉素-甲醇水（1:1）标准溶液和血清样品溶剂差异较大，建议标准品的加入体积不超过血清样品体积的5%。

结论 本文采用Vanquish Core DGLC自动化样品前处理的Online-SPE 方法，借助HPLC-DAD分析，开发了监测血清中抗生素类 药物万古霉素的方法。该方法具有灵敏度高、重现性好和耗时 短等特点。结果显示，此方法测定万古霉素的线性范围宽，在 0.502-20.08 ug/ml范围内保持线性良好，保留时间 RSD＜0.1% ，峰面积 RSD＜1.5%，结果表明该方法重复性好，准确度高， 且回收率在90.0%-115.0%，可用于定量分析血清中的万古霉 素，系统地为临床个性化、更精准、更合理、更安全地用药提 供可靠依据。