中药配方颗粒统一标准主要包括两大块色谱相关的内容： 首先是【特征图谱】，配方颗粒作为供试品溶液，其特征 图谱应与对照药材或者对照品参照物溶液色谱图具有一定 的相关性，相关指标有：特征峰的个数、特征峰的保留时间、 特征峰与参照峰的相对保留时间及相对峰面积，甚至有个 别品种还需要进行指纹图谱相似度评价。此外，紫外吸收 特征成分常用 UV 法进行检测，偶见多波长切换的方法， 而无紫外吸收的成分（如：麸炒薏苡仁中的甘油三油酸酯） 使用蒸发光散射检测器进行测定，往往需要高浓度的对照 品或者供试品溶液（如：1.0mg/ml的薏苡仁油对照品溶液）， 如何选择合适的通用型检测器实现高灵敏度的检测，应该 引起中药研究者的思考；其次是【含量测定】，含量测定 的色谱方法与特征图谱的色谱方法可能相同，也可能稍有 简化，定量指标也从 1 个到多个不等，其选取不仅与含量 多少有关，可能更多的考量在于该指标的生物活性是否是 该产品非常重要的药效物质基础，这一点与中药研究热点 应不谋而合。

成分复杂，水溶性成分众多，提取溶媒多与流动相存在极 性差异等，对于液相色谱方法开发具有一定挑战，同时对 于建立的统一标准，如何转移至实验室用于实际工作，复 现中需要关注的实验要点，赛默飞液相应用团队整理如下， 以助力客户在应用中顺利完成

1. 色谱柱的选择 基于应用团队对中药配方颗粒近 100 种的复现结果，考虑 到色谱柱的通用性和用户使用的方便程度，特做如下推荐， 在研发、质控过程中可以考虑选用

2. UHPLC 方法开发 中药配方颗粒标准研发的单位可以将已有 HPLC 方法利用 变色龙软件中自带的“Speed up”功能转换成为 UHPLC 方法，实现超快速液相方法的转换，该功能转换的结果 符合 2020 版《中国药典》四部 0512 通则的相关规定， 请大家放心使用，亦可使用赛默飞网页版方法转换工具

3. 电雾式检测器的使用 电雾式检测器（CAD）作为一款通用型检测器，参数设置 少，操作简单，维护较易。如有示差检测器或者蒸发光散 射检测器的色谱方法，可以直接转移至 CAD 检测器进行 复现尝试。需要注意的是：①该检测器同其他通用型检测 器，流动相体系不可使用不挥发性酸或者盐；②该检测器 灵敏度高，原方法中高浓度样品建议稀释 10-50 倍后进样， 避免检测器过载；③流动相条件允许的情况下，该检测器 可以直接与紫外检测器串联使用，色谱信息可以互相补充， 互相提示，对于反映中药产品真实质量很有帮助。可用于： 麸炒薏苡仁配方颗粒、地肤子配方颗粒、黄芪配方颗粒等。 

4. 梯度洗脱平衡色谱柱 梯度洗脱目前常用于中药复杂体系的分离分析，尤其在超 快速液相方法中，短短几分钟内，梯度变换幅度很大，且 方法后期并没有注明有恢复初始流动相比例的阶段，就很 容易误导个别用户连续进样，使得色谱柱在进样下一针的 时候，其内部有机相比例还未平衡，导致色谱峰出峰错乱、 堆叠、相对保留时间不符合规定值等异常问题，建议客户 在变色龙软件编辑方法时注意在原方法前后增设约 10 分 钟（平衡至少 5~10 个柱体积），变色龙软件支持预平衡 时间的设置，即预平衡后自动开始进样分析，该法不会变 动原色谱方法

5. 强溶剂效应 比如，中药配方颗粒参照物 ( 对照品 / 对照药材 ) 溶液的 制备，多采用一定比例的甲醇 - 水或乙醇 - 水作为提取溶 剂，而色谱方法里设置的流动相起始梯度可能为高比例水相，在色谱柱分离过程中，由于提取溶剂的洗脱强度高于 瞬时流动相的洗脱强度，就容易产生峰拖尾、峰裂分等峰 异常现象，甚至可能影响合理积分。建议客户可以采用以 下实验小技巧来避免强溶剂效应的产生：①可以减小进样 体积，如原 10μl 改为 5μl；②采购赛默飞液相配件（Strong Solvent Loop，PN：6036.2200）装在自动进样器与色谱 柱之间；③采用用户自定义进样程序（UDP）可自定义 编程在线稀释等功能，实例：赤芍配方颗粒（详情请参见 Application Note《全新高效液相色谱系统 Vanquish Core 并联分析赤芍配方颗粒特征图谱与含量测定》）；④在自 动进样器与色谱柱间使用一段较长的 viper 管路等。

6. 梯度延迟体积差异 因统一标准起草单位使用仪器未知，在方法复现过程中可 能会由于仪器间延迟体积的差异导致色谱图出现整体提前 或者整体靠后的现象，建议：①客户在选配仪器时可以订 购不同体积的静态混合器测试使用，在复杂流动相体系的 方法开发中可以适当调整混合器的体积，不仅可以满足优 异的混合精度，还能够复现标准谱图，最常用到的静态混 合器体积有：150μl 或者 350μl；②另外，Vanquish Core 液相色谱系统自带可调延迟体积（0-230μl），加配方法转 移套件，最大可增至 430μl，可以满足客户在不同仪器间 方法转移的需求，可向应用团队索取最新相关应用技术报 告。 

7. 含量测定方法建议 在现有中药配方颗粒国家 / 省级标准中，含量测定的方法 多采用等度洗脱的方法，然而并未注明全程洗脱时间，可 能会出现目标峰出峰较早，但其他非重点关注成分峰仍在 色谱图中不断洗脱出来，建议客户在此类情况中不要急于 结束洗脱，为了避免上一针样品中残留成分的干扰，样品 采集时间需大于主成分保留时间 6 倍以上，确保上一针样 品成分全部洗脱后，方可进行下一针样品的分析。

8. 其他：特征峰丢失 该问题的出现往往与前处理是否完整、提取溶剂是否合适、 色谱柱保留等问题有关，可以具体问题具体分析再排查