数据非依赖性采集(DIA)是随着定量蛋白质组学而建立的质谱扫描技术。 DIA 能够获得扫描范围 内所有母离子及二级子离子信息,不会造成低丰度离子信息的丢失,同时突破了高分辨质谱二级定量的通量 限制。 本研究基于静电场轨道阱 Q鄄qIT鄄OT 三合一质谱,发展了经典 DIA 方法以及 WiSIM鄄DIA 和 Full MS鄄DIA 两种全新 DIA 方法,并对 Hela 细胞全蛋白中添加的 10 条低浓度肽段进行定量分析,考察方法的线性、重现性 和灵敏度。 结果表明,3 种方法的定量限均低至 amol (14 ~ 435 amol),并展示出良好的线性和定性确证可靠 性。 其中,WiSIM鄄DIA 基于超高分辨一级监测定量,与经典 DIA 优势互补;Full MS鄄DIA 的选择窗口仅 3 amu, 能够直接进行搜库鉴定,实现了数据依赖性采集(DDA)和 DIA 的统一,摆脱了 DIA 依赖于 DDA 建立谱图库 的局限性。

仪器与试剂： Orbitrap Fusion 三合一质谱仪、EASY鄄nLC 1000 纳流超液相色谱(Thermo Fisher Scientific)。 标 准肽段由生工生物(上海)股份有限公司合成;乙腈、甲酸( Thermo Fisher Scientific);其它试剂均购自 Sigma鄄Aldrich 公司。