如何通过BLS电融合仪以及配件聚集创建胚胎
时间：2008-01-17 阅读：1093
如何通过BLS电融合仪以及配件聚集创建胚胎 |
注射器内吸入培养基，在35mm组织培养板上微滴（大致直径3mm）点样成若干行（列）。向培养板内小心注入石蜡油使其覆盖整板，注意不要使石蜡油直接倾倒在微滴上。石蜡油很容易越过这些微滴。石蜡油的量要能*覆盖这些微滴。 使用配件按照说明操作,制作凹陷。  37度, 5% CO2条件下孵育培养板几个小时，目的是让培养基在液滴内达到平衡。这一步可以在形成凹陷的步骤之前进行。 实验前准备好待聚集的细胞、组织或胚胎，不要将它们长时间暴露在室温下或脱离zui适培养条件时间过长。通过在组织培养板盖上加入几滴M2培养基和Tyrode’s 酸溶液来去除卵透明带。将组织培养板的培养区域表面如此处理后，胚胎将本能的黏附在表面——因此我们需要使用盖。确认所有培养基溶液和酸液都接近室温。将胚胎放置在一滴M2培养基上。取尽可能少的内含10-20个胚胎的培养基，并移到一滴酸液上。重复这个步骤并将胚胎移到新的一滴酸液上。让胚胎在吸头内保持上下移动，观察卵透明带是如何溶解的。迅速将胚胎移入M2培养基。用几滴培养基溶液洗涤并移入刚才制成的凹陷中。 |