多肽的溶解和保存
时间：2008-06-05 阅读：3200
建议先用少量肽来试验zui适溶解方法，只有当多肽*溶解后，才能加入溶液并将之稀释至zui终浓度。即先溶解，后加入缓冲液。注意：总是将多肽加入到适当溶剂中搅拌，而不能采用其它方式。 冻干多肽的溶解 多肽溶解中的主要问题是二级结构的形成。虽然疏水肽链二级结构的形成更明显，但除了zui短的肽链外，该现象发生在几乎所有肽链，与极性无关。因此，溶解多肽的*个原则是用无菌的蒸馏水或去离子水（如果条件允许则用无氧水）。多肽溶液可能遇到细菌降解。为避免该现象的发生，多肽应溶解在无菌的蒸馏水中，或者用0.45或0.2µm孔径的滤膜过滤除菌。包含Cys、Met、Trp的多肽特别容易氧化，因此应该溶于无氧的水中。无氧水可以通过注入惰性气体（氮、氦、氩）减压除气得到。若多肽不溶于纯水，超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。注意：超声处理会引起溶液发热和多肽降解。若多肽中包含多个碱性氨基酸，使用1~10%的乙酸水溶液；对于疏水性非常强的多肽，则使用50%乙酸。若多肽中含有大量酸性氨基酸，可用1~10%氨溶液或乙酸乙基吗啡或重碳酸盐等挥发性的碱性缓冲液溶解。pH值在层析前必须调整。异丙醇和乙腈能溶解中等大小的肽。若肽要上柱，有机溶剂的量则必须很少，否则将严重影响滞留时间。若多肽因为含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烃侧链而高度疏水，或为中性肽时，DMF或DMSO等膜变性剂的使用，有助于多肽的溶解。a. 高浓度膜变性剂通过破坏多肽的二级结构而助溶。b. 膜变性剂适于多肽分析液的制备，但可能会对其生物活性的研究工作造成干扰。c. DMF是*变性剂（zui高浓度可达30%），滴加至多肽溶解。d. 反相层析时，DMF将与洗脱液前峰一起流出，依进样量的多少，峰值可能很高。大多数肽能在大量DMF流出后几分钟内流出，若肽链很小，洗脱太早，多肽的量将降低。 冻干多肽的保存 所有标明“保持冻干”的产物，都必须保存在冰冻条件下，-20℃，若保存在-10℃以下，大多数肽可维持几年的活性。当使用冰冻产品时，开盖之前，瓶或试管应在装有新鲜干燥剂的干燥箱内升至室温。对于保存于-20℃的产品，这个过程需要一小时或更长，随包装大小而异。否则，当瓶打开时，水气进入导致多肽凝缩而降低其稳定性。一旦打开，应迅速称量完毕，并立即密闭以免潮解，尤其亲水肽更应注意。 多肽溶液的保存 多肽溶液比干粉的稳定性差很多，为了得到结果，遵循下列原则：反复冻融有损于肽的活性，所以建议分装成小包装保存。需要多少解冻多少，用后弃掉剩余物。溶于pH5~7无菌的缓冲液中，贮存于-20℃。包含Cys、Met、Try、Glu、Asp的多肽易于氧化，因此须保存在无氧化剂的环境中。由于细菌能降解多肽，因此贮存前必须过滤除菌。相关资料请咨询美国自然基因有限公司邓博士www.naturegene.cn
